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干细胞是一类在拥有自我更新和潜在分化能力的同时能保持未分化状态的细胞(1)。而成人外周血单个核细胞(hPBMCs)中存在一小簇异质性的干细胞。由于这些干细胞具有多向分化潜能、获取方便、来源广泛的特点,使其成为干细胞治疗的理想资源。视网膜变性是一种表现为进行性感光细胞及色素上皮功能丧失的遗传性疾病,是眼底病导致失明的重要原因之一。该病至今还没有有效的治疗方法,而干细胞移植治疗为视网膜变性疾病的治疗提供了一条新的途径。干细胞治疗发挥疗效的前提条件是干细胞能够移植到体内并长时间存活。本研究的主要目的在于实现hPBMCs在体外的预诱导培养,并将体外预诱导培养后的hPBMCs移植到视网膜变性小鼠(视网膜色素变性模型小鼠和视网膜慢变性小鼠)的视网膜下腔,研究hPBMCs的存活以及对小鼠视网膜功能恢复的影响。本论文首先从健康成人静脉中抽取外周血;用淋巴细胞分离液从外周血提取hPBMCs。将获取的hPBMCs与新生大鼠的视网膜进行4天的预诱导性共培养,并通过实时定量PCR及流式细胞术检测预诱导培养后,视网膜神经细胞及光感细胞的标记物表达情况,验证hPBMCs分化成为神经细胞和光感细胞的可能性。再接着把诱导培养后细胞群注射到视网膜变性小鼠的视网膜下腔。最后,在细胞移植后第5个月用视网膜电生理检测仪检测小鼠视网膜生物电的恢复情况;在细胞移植后第6个月用免疫荧光化学、流式细胞术及RT-PCR来分析移植的hPBMCs的存活情况。移植hPBMCs六个月后视网膜慢变性小鼠眼球切片的免疫荧光结果显示,在视网膜的内核层和节细胞层均有移植的细胞存在,而且部分细胞有神经干细胞标志物Nestin,神经祖细胞标志物Vimentin、βⅢ-tubulin,神经细胞标志物MAP2,及光感细胞标志物Rhodopsin表达。流式细胞术检测显示,实验组的手术眼有19.35±10.33%的细胞表达抗人线粒体特异性抗体信号;同样的,在实验组的非手术眼也有11.55±1.52%细胞表达。PCR结果显示,人的细胞色素b基因在移植六个月后仍在小鼠的实验眼中有表达。全视野视网膜电图(ERG)结果显示,移植五个月后,有部分治疗小鼠的实验眼恢复对光反应。以上结果表明,移植到视网膜下腔的经预诱导培养后的成人外周血单个核细胞在移植后六个月内能以神经细胞及光感细胞的方式存活,并发挥修复作用。