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目的:通过对CIRI大鼠脑组织中P2X7R、NLRP3、pro-caspase-1、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18表达水平的变化,探讨CIRI大鼠是否发生了焦亡,眼针对CIRI大鼠的抗炎机制是否是通过调控细胞焦亡实现的。方法:将85只大鼠随机分为16只假手术组,69只造模组。造模组大鼠用线栓法制备CIRI模型,假手术组大鼠仅在大鼠颈部造成颈部肌肉创伤后进行缝合。造模成功后对大鼠进行行为体征评分与TTC染色观察大鼠脑组织的缺氧情况。完成评分后的大鼠再用随机数表法分为模型对照组,眼针组与抑制剂组。假手术组大鼠正常饲养至实验结束,模型对照组大鼠饲养至再灌注后。眼针组大鼠眼针干预时间为再灌注即刻、8h、16h、24h;干预穴区选择肝胆区,肾膀胱区,上下焦四区。抑制剂组大鼠注射格列本脲。末次针刺后,观察大鼠的一般状态,并对各组大鼠进行行为体征评分。采用水合氯醛过量麻醉法处死大鼠,采用电镜观察细胞的形态学变化情况;采用ELISA法检测大鼠脑组织中IL-1β、IL-18的表达含量;采用免疫组化及western-blot法检测脑组织中P2X7R、NLRP3、pro-caspase-1、ASC、caspase-1的表达水平。结果:1.眼针对CIRI大鼠的行为学评分的影响与假手术组比较,模型对照组大鼠行为体征评分明显增高,差异有统计学意义(p<0.01);与模型对照组比较,眼针组与抑制剂组大鼠行为体征评分明显降低,差异有统计学意义(p<0.01)。2.眼针对神经元细胞形态的影响假手术组:可见神经元细胞完整,细胞通透性未见异常,细胞膜完整性未见异常,细胞内细胞器及细胞内容物等未见异常。模型对照组:可见细胞肿胀,细胞膜破损、完整性被破坏,细胞内容物及细胞器被破坏,并向细胞外释放,细胞发生损伤。眼针组:与假手术组大鼠神经元细胞形态相比,眼针组大鼠神经元细胞通透性增高,细胞肿胀,细胞内细胞器及内容物偶见损坏。抑制剂组:与眼针组大鼠神经元细胞形态相似,细胞膜通透性稍有增高,细胞相对肿胀,但内容物完整,偶见细胞器损坏;3.眼针对CIRI大鼠脑组织中IL-1β、IL-18炎性因子表达水平的影响与假手术组比较,模型对照组大鼠脑组织中IL-1β、IL-18表达水平显著增强;与模型对照组比较,眼针组与抑制剂组大鼠脑组织中IL-1β、IL-18表达水平显著降低,差异有统计学意义(p<0.01)。4.眼针调控CIRI大鼠细胞焦亡相关蛋白的表达4.1 western-blot法检测脑组织中P2X7R、NLRP3、pro-caspase-1、ASC、caspase-1的表达水平:与假手术组比较,模型对照组大鼠脑组织中P2X7R、NLRP3、pro-caspase-1、ASC、caspase-1表达水平显著增强,差异有统计学意义(p<0.01)。与模型对照组比较,眼针组P2X7R、NLRP3、pro-caspase-1、ASC、caspase-1表达水平显著降低,差异有统计学意义(p<0.01);抑制剂组大鼠脑组织中NLRP3、pro-caspase-1、ASC、caspase-1表达水平显著降低,差异有统计学意义(p<0.01),P2X7R表达含量无明显变化,差异无统计学意义(p>0.05)。与眼针组比较,抑制剂组大鼠脑组织中NLRP3、pro-caspase-1、ASC、caspase-1表达水平无明显变化,差异无统计学意义(p>0.05),P2X7R表达水平明显增高,差异有统计学意义(p<0.01)。4.2免疫组化法检测脑组织中P2X7R、NLRP3、pro-caspase-1、ASC、caspase-1的表达水平:与假手术组比较,模型对照组大鼠脑组织中P2X7R、NLRP3、pro-caspase-1、ASC、caspase-1表达水平显著增强,差异有统计学意义(p<0.01)。与模型对照组比较,眼针组P2X7R、NLRP3、pro-caspase-1、ASC、caspase-1表达水平显著降低,差异有统计学意义(p<0.01);抑制剂组大鼠脑组织中NLRP3、pro-caspase-1、ASC、caspase-1表达水平显著降低,差异有统计学意义(p<0.01)。与眼针组比较,抑制剂组大鼠脑组织中NLRP3、pro-caspase-1、ASC、caspase-1表达水平无明显变化,差异无统计学意义(p>0.05),P2X7R表达水平明显增高,差异有统计学意义(p<0.01)。结论:1.眼针能够减少细胞焦亡的发生;2.眼针能够通过调控P2X7R、NLRP3、pro-caspase-1、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18表达水平而发挥抗焦亡作用从而抑制炎症发应。