临床应用改良法制备PRP对兔来源脂肪间充质干细胞成脂分化和细胞增殖影响

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:ab869
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目的:讨论临床应用Tubex改良法制备自体富血小板血浆(platelet-richplasma,PRP)对兔来源脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCS)成脂分化及细胞增殖的影响。方法:Ⅰ型胶原酶消化获得的新西兰大白兔附睾部脂肪组织,体外分离、培养得到脂肪间充质干细胞,采用形态学和多向诱导分化进行鉴定。取新西兰大白兔腹主静脉血,传统二次离心法和Tubex(封闭离心装置)改良法制备PRP(platelet-rich plasma),显微镜下分别对两组PRP行血小板计数。CCK-8试剂盒,采用酶标仪于450nm处分别测定Tubex改良法PRP组、传统二次离心法PRP组、对照组、空白组四组细胞在不同时间点(7d、10d、14d)吸光度值。在同等条件下,经异丙醇萃取出细胞内脂滴染色的油红O,酶标仪于510nm处测定Tubex改良法PRP组、传统二次离心法PRP组、对照组、空白组四组细胞在不同时间点(7d、10d、14d)成脂细胞内脂滴的含量。结果:1.附睾部脂肪垫提取出的脂肪干细胞,贴壁早期为椭圆形,逐渐变为长梭状,随着细胞生长增殖,呈漩涡状排列;倒置显微镜下,形态学符合干细胞形态。经成脂和成骨诱导,于14天分别用油红O染色和茜素红染色,均能成功着色,证实为脂肪细胞和骨细胞,证明了细胞的多向诱导分化能力。2.经血小板计数,发现血小板数量在Tubex法制备的PRP中明显高于传统二次法制备的PRP。3.Tubex改良法制备PRP和传统二次离心法制备PRP进行干预的两组细胞,相比较正常诱导组,脂滴染色的细胞较多,萃取出的油红O含量较高,吸光度值较高,其中Tubex改良法制备PRP组脂滴染色的细胞更多,萃取出的油红O含量更高,吸光度值也更高。4.CCK-8测量的吸光度值显示,同一时间段,正常全培培养的空白组细胞吸光度值最低,两组PRP组的细胞较正常诱导组吸光度值高,其中Tubex组的吸光度值高于其它实验组。结论:体外分离、培养所得的细胞经形态学和多向诱导分化,确定为兔来源脂肪间充质干细胞;Tubex法制备的PRP血小板浓度明显大于传统二次离心法所制备的PRP;相较于不加PRP的对照组,传统二次离心法和Tubex改良法制备PRP对兔来源脂肪间充质干细胞的成脂分化、细胞增殖均有促进作用, Tubex改良法制备PRP对兔来源脂肪间充质干细胞的成脂分化、细胞增殖促进作用较为明显。
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