论文部分内容阅读
本实验旨在研究高EGCG茶叶(CFT-1茶叶)与一般茶叶品种对DEN(二乙基亚硝胺)诱发的大鼠肝癌的化学预防效果的差异及其对防癌抗癌机制相关基因PCNA、Bcl-2和Bax的影响。CFT-1茶叶中EGCG含量高达13.42%,而普通茶叶中只含4.32%,特别是协同抗癌的成分含量也很高(含ECG 3.58%,C 3.0%,总儿茶素22.49%,咖啡因 5.38%)。本实验分别用25mg/kg、50mg/kg剂量的DEN建立大鼠肝癌模型,筛选出最佳注射剂量。再选用40只雄性的wistar大鼠,按体重分为4组:空白对照组、模型组、普通茶叶组和CFT-1茶叶组,其中模型组、茶叶组注射等量的DEN,茶叶组在注射DEN的同时,给予茶水干预,实验结束后检测大鼠血清肝功能指标,采用免疫组化、Western blotting和荧光定量方法检测与肝癌相关基因PCNA、Bcl-2和Bax蛋白的表达情况,以研究CFT-1茶叶可能的抗癌防癌机制。结果如下:1)在DEN剂量筛选研究中,两模型组肝脏肿瘤发生率都达100%,25mg/kg剂量组死亡率为10%,50mg/kg剂量组死亡率高达40%,所以选择25mg/kg的注射剂量作为后续实验的最佳建模剂量;2)增殖细胞核抗原(PCNA)能较好的反映出细胞增殖的状态,主要存在于肿瘤细胞中;Bax是促癌细胞凋亡基因;Bcl-2是抑癌细胞凋亡基因。免疫组化结果显示,模型组的大鼠肝脏的PCNA和Bcl-2的阳性表达量比空白对照组显著较高,CFT-1茶叶组Bcl-2的阳性表达量比模型组和普通茶叶组显著降低;CFT-1茶叶组大鼠肝脏Bax的阳性表达量最高,模型组大鼠肝脏的Bax的阳性表达量最低;3)Western blotting实验结果显示:CFT-1茶叶组大鼠肝脏中,PCNA和Bcl-2的表达量都比模型组和普通茶叶组低,其中PCNA的表达量分别降低了 24.85%、8.87%(P<0.05),Bcl-2 的表达量分别降低了 41.79%、32.63%(P<0.05);而CFT-1茶叶组Bax的表达量比模型组和普通茶叶组分别提高了 71.63%、59.73%(P<0.05);4)荧光定量结果显示,模型组大鼠肝脏中,PCNA和Bcl-2mRNA表达量显著高于空白对照组和茶叶各组;CFT-1茶叶组中,大鼠肝脏PCNA mRNA的表达量比模型组和普通茶叶组分别降低了 25.03%、15.72%(P<0.05),Bcl-2mRNA的表达量比模型组和普通茶叶组分别降低了 53.15%、47.22%(P<0.05);高EGCG茶叶CFT-1显著提高大鼠肝脏BaxmRNA的表达量,比模型组和普通茶叶组分别提高了 98.43%、64.37%。综上所述,本实验成功建立大鼠肝癌模型,且肝癌的发生与PCNA、Bcl-2和Bax的表达有关。免疫组化、Western blotting和荧光定量PCR结果都说明了CFT-1茶叶可以通过降低PCNA、Bcl-2的表达量,增加Bax的表达量抑制肝癌的发展,有效保护肝脏,且抗癌效果强于普通茶叶。