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中国是世界养猪数量较多的国家之一,猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)和猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)的感染均相当严重。疫苗免疫可作为最常用且最有效的手段来预防疾病的发生。但是传统的免疫预防手段存在诸多问题,而病毒活载体疫苗同时具备活疫苗的高效免疫力、低成本及灭活疫苗的安全性好等优点,使其成为当今和未来研制开发疫苗的主要方向之一。IL-18表达的基因是诱导T、B和NK细胞反应的强有力佐剂,可用于治疗细菌、病毒感染性疾病,过敏性疾病和肿瘤。另外,将IL-18基因克隆到载体中,能够实现标准化生产,可大大提高实用价值。因此,在前期构建的重组质粒p GO基础上,插入猪IL-18基因,构成的重组质粒p GO18与PRV弱毒HB98株基因组DNA共转染ST细胞,获得共表达PCV2 Cap蛋白和猪IL-18的重组PRV,为PCV2活载体疫苗的研制,开发利用猪IL-18的佐剂效应及构建共表达猪IL-18基因和保护性抗原基因的重组PRV病毒疫苗奠定了基础。在本研究中,将重组质粒p GEMT-IL18经BglⅡ酶切处理得到IL-18基因片段,克隆到经同样处理并磷酸化的p GO质粒中,成功构建了重组转移质粒p GO18,并通过PCR、酶切、测序鉴定其正确性。将重组转移质粒p GO18与伪狂犬病毒弱毒HB98株基因组DNA共转染ST细胞,经绿色荧光空斑筛选和纯化后,最终得到重组病毒PGO18。分别采用RT-PCR和Western blot蛋白印迹法从转录和蛋白水平鉴定PGO18能否在ST细胞内表达。为了探讨重组猪伪狂犬病毒PGO18作为疫苗候选株的潜在价值,对其在ST细胞上的培养特性,ST、VERO、IBRS-2、PK-15和IPEC细胞上增殖情况,生长特性,遗传稳定性,对小鼠安全性及其理化特性等生物学特性进行了研究。以上试验表明:重组病毒PGO18株具有与亲本株PRV HB98相似的培养特性及生长特性,在ST、VERO和IBRS-2细胞上的TCID50与亲本株(107.75/0.1m L)相当,遗传稳定性好,安全性试验表明该重组病毒对小鼠安全;理化特性试验说明该病毒具有猪伪狂犬病病毒的通性。为了评价重组猪伪狂犬病毒PGO18的免疫效果,将100只6周龄雌性昆明小鼠随机分为5组,分别用重组病毒PGO18和PGO,PRV弱毒株HB98,PCV2灭活商品苗和1640细胞培养基免疫,四周后二次免疫,二免后四周分别用PCV2 DF强毒和PRV NY强毒接种小鼠。ELISA和血清中和试验检测小鼠血清中PCV2和PRV抗体效价,MTT法检测淋巴细胞的增殖反应,流式细胞仪检测脾T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+和CD8+数量。结果表明:与重组病毒PGO组相比,PGO18能更有效地刺激小鼠机体产生体液免疫和细胞免疫应答,攻毒保护试验表明重组病毒PGO18组能有效抵抗PCV2和PRV强毒攻击。因此,IL-18基因可作为免疫佐剂增强重组疫苗的免疫效果,使重组病毒具有良好的免疫原性,有望成为防治PCV2和PRV的候选疫苗株。