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目的泼尼松(Prednisone, Pred)和甲泼尼龙(Methylprednisolone, MP)是广泛应用于临床的两种糖皮质激素类药物,泼尼松本身没有药理活性,需经肝脏11β-羟基类固醇脱氢酶1(11β-hy droxysteroid dehydrogenase1,11β-HSD1)转化为有活性的泼尼松龙继而发挥作用。临床上对于转氨酶升高的肝功受损的病人医生通常会选择有活性的甲泼尼龙而不选择泼尼松。本课题以四氯化碳致肝损伤大鼠为研究对象,观察肝损伤时泼尼松、泼尼松龙及甲泼尼龙药代动力学参数是否发生变化,探讨肝损伤对Pred、泼尼松龙、MP药动学的影响,评价肝损伤时应用泼尼松和甲泼尼龙是否需要调整剂量,为临床上转氨酶升高病人应用泼尼松、泼尼松龙和甲泼尼龙时的有效性与安全性提供初步的动物试验数据。方法1.肝损伤大鼠模型的建立肝损伤组大鼠腹腔注射40%CC14溶液,24h后取血测定血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、白蛋白(A1b)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、总胆红素(TBIL),并对大鼠解剖取肝脏,HE染色行病理学检查,验证肝损伤模型是否成功。2.泼尼松及泼尼松龙在正常及肝损伤大鼠体内的药代动力学实验取24只SD大鼠,雌雄各半,随机分为4组,分别为泼尼松正常组(PS-C组)、泼尼松肝损伤组(PS-Ⅰ组)、泼尼松龙正常组(PL-C组)和泼尼松龙肝损伤组(PL-Ⅰ组),每组6只,雌雄各半。按照“肝损伤大鼠模型的建立”项下方法建立肝损伤模型,24h后各正常组和肝损伤组分别灌胃给予泼尼松或泼尼松龙混悬液(15mg·kg-1),于给药后10min、20min、30min、45min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h取血。采用高效液相色谱法(HPLC)分析测定泼尼松龙的血药浓度。3.甲泼尼龙在正常及肝损伤大鼠体内的药代动力学实验取12只SD大鼠,雌雄各半,随机分为2组,分别为甲泼尼龙正常组(MP-C组)和甲泼尼龙肝损伤组(MP-Ⅰ组),每组6只,雌雄各半。按照“肝损伤大鼠模型的建立”项下的方法建立肝损伤模型,24h后正常组及肝损伤组灌胃给予甲泼尼龙混悬液(25mg·kg-1),于给药后15min30min、45min、1h1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、10h取血。采用高效液相色谱法(HPLC)分析测定甲泼尼龙的血药浓度。4.数据统计及分析对大鼠注射CCl4前后各生化指标进行双侧t检验；采用DAS ver2.0(Drug and Statistics for Windows)程序软件计算药动学参数,对各组主要药动学参数AUC0-t, AUC0-∞、MRT0-t, MRT0-∞、t1/2、Cmax、CL和V进行双侧t验。结果1.肝损伤模型的建立大鼠注射四氯化碳24h后,AST、ALT和TBIL明显升高(P<0.05), Alb.y-GT不变(P>0.05)；病理学检查可见肝损伤大鼠肝组织肝小叶结构保留,局部排列紊乱,中央静脉周围组织轻度水肿,肝细胞索排列尚整齐,肝血窦未见明显充血,切片内未见明确门管区。2.泼尼松龙及甲泼尼龙体内测定方法的方法学考察本实验所建立的泼尼松龙和甲泼尼龙的HPLC测定方法,样品及内标峰形良好,血浆中杂质峰不干扰样品的测定；泼尼松龙40.01027～5.125μg·mL-1范围内线性关系良好,甲泼尼龙在0.03109～1.4805μg·mL-1范围内线性关系良好；精密度、准确度、回收率、稳定性等均符合药动学研究相关测定要求。3.泼尼松药动学参数及其统计学检验结果对肝损伤组与正常对照组进行双侧t检验,泼尼松肝损伤组与正常组(Prednisone-Injury group VS Prednisone-Control group, PS-I组VS PS-C组)相比,泼尼松活性泼尼松龙的各药动学参数均无显著性差异(P>0.05)；肝损伤影响亚组分析：将肝损伤组雄性与正常组雄性(PS-I-♂VS PS-C-(?))大鼠相比,肝损伤组雄性大鼠的泼尼松龙的清除率CL显著下降(26.18±6.182VS40.06±4.736L-h-kg-1, P<0.05),其余各药动学参数均无统计学差异(P>0.05)；将肝损伤组雌性与正常组雌性(PS-I-♀VS Ps-C-♀)大鼠相比,各药动学参数均无统计学差异(P>0.05)；性别影响分析：将正常组内雄性与正常组内雌性(PS-C-♂VS PS-C-♀)大鼠比较,正常组内雄性大鼠的药动学参数CL、V显著增大(P<0.05),AUCo. t.AUC0-∞、Cmax显著减小(P<0.05),MRT0-∞、t1/2显著缩短(P<0.05)；将损伤组内雄性与损伤组内雌性(PS-I-♂VS PS-I-♀)大鼠比较,损伤组内雄性大鼠的药动学参数CL、V显著增大(P<0.05),AUC0-t.AUC0-∞、Cmax显著减小(P<0.05),MRT0-∞、t1/2显著缩短(P<0.05),MRT0-t、Tmax无统计学差异。4.泼尼松龙药动学参数及其统计学检验结果泼尼松龙肝损伤组与正常组(Prednisolone-Injury group VS Prednisolone-Control group,PL-I组VS PL-C组)比较,各药代动力学参数均无显著性差异；肝损伤影响亚族分析：将泼尼松龙肝损伤组雄性与正常组雄性(PL-I-♂VS PL-C-♂),泼尼松龙肝损伤组雌性与正常组雌性(PL-I-♀VS PL-C-♀)大鼠相比,各药动学参数均无显著性差异(P>0.05)；性别影响分析：将正常组内雄性与正常组内雌性(PL-C-♂VS PL-C-♀性)大鼠比较,各药动学参数无显著性差异(P>0.05),将肝损伤组内雄性与肝损伤组内雌性(PL-I-♂VS PL-I-♀)大鼠比较,肝损伤组内雄性大鼠的药动学参数CL明显增加(P<0.05),AUC0-∞显著减小(P<0.05),MRT0-t,MRT0-∞、t1/2均显著缩短(P<0.05),其余参数均无显著性差异(P>0.05)。5.甲泼尼龙药动学参数及其统计学检验结果甲泼尼龙肝损伤组与正常组(MP-Injury group VS MP-Control group,MP-I组VS MP-C组)比较,各药代动力学参数均无显著性差异；肝损伤影响亚族分析：将甲泼尼龙肝损伤组雄性与正常组雄性(MP-I-♂VS MP-C-♂)比较,各药动学参数均无统计学差异(P>0.05)；甲泼尼龙肝损伤组雌性与正常组雌性(MP-I-♀VS MP-C-♀)比较,各药动学参数均无统计学差异(P>0.05)；性别影响分析：将正常组内雄性与正常组内雌性(MP-C-♂VS MP-C-♀)大鼠比较,正常组内雄性大鼠的CL、V明显增加(P<0.05),AUC0-∞明显减小(P<0.05),其余药动学参数均无统计学差异(P>0.05)；将肝损伤组内雄性与肝损伤组内雌性(MP-I-♂VS MP-I-♀)大鼠相比,肝损伤组内雄性大鼠的Cmax明显减小(P<0.05),其余药动学参数均无显著性差异(P>0.05)。结论1.本实验建立的CCl4诱导的急性肝损伤大鼠模型稳定,该模型可用于肝损伤对药物代谢影响的研究；2.本实验建立的泼尼松龙和甲泼尼龙体内测定方法专属性强、稳定性好、回收率高,适合泼尼松龙和甲泼尼龙体内血药浓度的测定；3.肝损伤可影响泼尼松在雄性大鼠体内的代谢,使泼尼松的活性代谢产物泼尼松龙的清除率下降,而对于雌性大鼠,肝损伤时其药动学参数未出现显著性改变；肝损伤时泼尼松龙和甲泼尼龙在大鼠体内的药动学参数未出现显著性改变；另外泼尼松、泼尼松龙和甲泼尼龙三种药物在大鼠体内药物代谢动力学存在性别差异。