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脂肪酶(LIPASE)是一种应用广泛的、高效的绿色生物催化剂,但是游离脂肪酶不够稳定、不能回收再利用等缺陷,限制了它的工业应用,为了提高脂肪酶在实际应用中的稳定性,重复使用性。本文以牛胰脂肪酶(CATTLE PANCREATIC LIPASE,CPL)为研究对象,通过交联酶聚体(CLEAS)技术,制备了牛胰脂肪酶交联酶聚集体(LIPASE-CLEAS),牛血清白蛋白牛胰脂肪酶交联酶聚体(BSA-LIPASECLEAS),将脂肪酶界面激活与纳米花固定化酶技术相结合制备了牛胰脂肪酶-磷酸铜-杂化纳米花,并对三种固定化酶的酶学性质进行了研究。1)牛胰脂肪酶交联酶聚集体制备条件的确定以及酶学性质研究采用单因素方法对交联剂浓度,沉淀剂用量,交联时间进行了优化。确定LIPASE-CLEAS的最佳制备条件:硫酸铵饱和度80%,交联剂终浓度1.5%,交联时间1 H。在此条件下,酶活回收率达到最高。和游离脂肪酶相比,LIPASE-CLEAS最适催化温度提高10℃。而且其温度稳定性、酸碱耐受性、储存稳定性和操作稳定性有所提高。重复使用7次后,LIPASE-CLEAS仍能保持初始酶活的40%。2)牛血清白蛋白牛胰脂肪酶交联酶聚体的制备及其酶学性质研究采用单因素的方法对牛血清白蛋白浓度,交联剂浓度,沉淀剂浓度,交联时间进行了优化。获得的优化制备条件为:BSA的添加浓度为0.05 G/L,戊二醛质量浓度为1%,(NH3)2SO4的饱和度为80%,交联时间为2 H。在此条件下制备的BSALIPASE-CLEAS最大酶活回收率70%,比不添加BSA的LIPASE-CLEAS酶活回收率提高15%。与游离酶相比,BSA-LIPASE-CLEAS的最适反应温度提高了10℃,而且,BSA-LIPASE-CLEAS的温度稳定性、储存稳定性和P H稳定性比游离酶和LIPASECLEAS都有较大提高。在重复使用8次后,BSA-LIPASE-CLEAS仍能保持初始酶活的80%,但LIPASE-CLEAS只保留了初始酶活的30%。3)表面活性剂界面激活脂肪酶磷酸铜杂化纳米花的制备及其酶学性质研究通过对脂肪酶浓度,硫酸铜添加量,以及表面活性剂浓度进行优化,获得的界面激活杂化纳米花的优化制备条件为:十六烷基三甲基溴化铵浓度为0.25MMOL/L,脂肪酶浓度0.025 G/L,在300 ML磷酸缓冲体系(P H7.4,100 MMOL/L)中,120 MMOL/L硫酸铜添加量为2 M L。在此条件下,制备出的界面激活纳米花的比酶活是游离酶的3.6倍,比未激活纳米花高出7.7倍,重复使用8次后,界面激活纳米花酶活力仍然保持初始酶活的100%。