FvCO4在草莓果实早期发育中的功能鉴定

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CONSTANS类基因编码锌指蛋白类转录因子,目前的研究多聚焦于该类基因在植物光周期诱导成花的调控作用。前期研究发现草莓中的一个CO类基因FvCO4在草莓果实髓部和皮层特异表达,其表达水平响应去雄果实的激素处理,猜测该基因可能参与了草莓果实的早期发育。本论文以二倍体森林草莓‘YW5AF7’为主要试验试材,对FvCO4基因的分子特性及对激素和相关抑制剂的表达响应进行了研究,通过CRISPR基因编辑技术在森林草莓基因组中敲除该目的基因,以明确其功能。主要研究结果如下:1.与对照果实相比,涂抹生长素抑制剂及赤霉素抑制剂的草莓果实发育明显延缓。2.亚细胞定位表明FvCO4蛋白定位于细胞核中;自激活鉴定发现FvCO4蛋白不具备自激活的能力;酵母单杂交试验证明FvCO4蛋白可以与FvFT2的启动子结合。3.利用农杆菌介导的叶盘转化法,对森林草莓‘YW5AF7’基因组的FvCO4基因进行了CRISPR基因编辑,PCR及测序鉴定证明共获得了12株发生基因敲除的编辑株系。4.FvCO4基因敲除后,功能缺失株系的果实出现发育明显受阻的现象,证明该基因的功能与草莓果实发育有关;花粉扫描电镜检测表明转基因株系花粉形态并未发生明显变化;组织切片结果表明转基因株系果实髓部和皮层细胞的细胞分裂受到抑制;定量检测结果表明花托中FT类同源基因以及细胞分裂相关基因表达量在花后10 d时下调明显。5.构建了ProFvCO4::GUS的启动子活性验证载体,经遗传转化获得了2个转化株系。此外,本研究还构建了FvCO4及FvFT2的超表达载体以供后续研究所需。
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