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目的:
探讨脓毒症发展过程中外周血淋巴细胞及其亚群、血浆细胞色素C(Cyt-c)、淋巴细胞溶解液凋亡蛋白酶3(Caspase-3)、IL-6、IL-10、IL-6/IL-10、血小板计数(PC)和相关临床评分与多器官功能障碍综合征和死亡的相关性及其作为MODS和死亡预警指标的可行性。
方法:
1.选择研究对象及分组根据2001年国际脓毒症会议制定的关于脓毒症诊断新标准制定入选标准,剔除入院时已发生或入院后3d内发生MODS和符合其他排除标准的患者。对研究对象进行常规治疗,观察患者的病情发展变化及转归。根据脓毒症患者的病情发展变化将研究对象分为两个组:脓毒症非MODS组、脓毒症并发MODS组。所有入选患者随访28d,根据随访的结果分成死亡组和存活组。
2.观察指标的测定①一周内每天进行一次APACHEⅡ和SOFA评分;②ELISA法测定入选对象入选第0、1、3、7d天外周血血浆中Cyt-c及淋巴细胞溶解液中Caspase-3的含量;③ELISA法测定入选对象第0、3d外周血血浆IL-6、IL-10浓度;④流式细胞仪测定入选对象第0、1、3、7d外周血淋巴细胞及其亚群的变化;⑤HEMACELLPlus全自动血细胞分析仪每日检测入选对象血常规。
3.数据分析和统计学处理①比较MODS组与非MODS组之间,死亡组与生存组之间外周血淋巴细胞计数、T淋巴细胞计数、CD4+T淋巴细胞计数、Cyt-c、Caspase-3、IL-6、IL-10、IL-6/IL-10和PC的差别,分析其变化与病情轻重、预后的关系;②将入选对象上述检测指标与APACHEⅡ、SOFA评分进行相关分析;③将所有检测的指标单因素分析,有统计学意义者绘制预测预后的ROC曲线,评价其整体预测功能;单因素分析有统计学意义的预测指标确定最佳截断点,用Youden指数(YI)进行综合评价其预测准确度。
应用SPSS13.0统计软件,所有数据均进行正态性检验,正态分布的计量资料以均数±标准差(x±s)表示,两组均数比较采用t检验,相关分析甩Pearson相关分析;非正态分布的计量资料以中位数、平均秩表示,采用非参数检验的独立样本检验,相关分析用Spearman秩相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。
主要结果:
第一章、机体炎症反应与MODS发生和临床结局的关系。
1.脓毒症MODS组第3d血浆IL-6浓度显著高于脓毒症非MODS组(P<0.05);血浆IL-10浓度第0、3d两组间比较无统计学差异;脓毒症MODS组第3d血浆IL-10/IL-6显著低于脓毒症非MODS组(P<0.05),第0d两组间比较无统计学差异。第3天血浆IL-6浓度和血浆IL-10/IL-6均可预测7d内MODS的发生(P均<0.05);单因素分析有统计学意义的预测指标确定最佳截断点,用Youden指数(YI)进行综合评价其预测准确度,YI分别为50.4%和40.7%,均高于SOFA评分31.4%,YIIL-6(50.4%)>YIAPACHEⅡ(41.4%),YIIL-10/IL-6(40.7%)PC3d>PC2d>PC0d,取最佳截断点,YI从大到小依次为:PC0d62.5%、PC3d58.3%、PC1d和PC2d52.1%、APACHEⅡ评分41.4%、SOFA评分31.4%。
2.脓毒症MODS组病死率显著高于脓毒症非MODS组,在MODS患者中,死亡组PC低于存活组,但两组间比较差异亦无统计学意义,在非MODS患者中则没有相应的变化趋势,提示脓毒症致MODS患者早期PC可能是28天死亡的预测因子之一,在脓毒症非MODS患者中预测作用未能证实。
3.第3d血浆IL-6与第1、2、4-7dPC之间呈显著负相关(P均<0.05);第3d血浆IL-10/IL-6与第6天PC呈显著正相关(P<0.05)。
第三章、外周血淋巴细胞凋亡与MODS发生和临床结局的关系。
1.脓毒症MODS组第0、1、3d淋巴细胞计数、第0、3dT淋巴细胞计数和第0、3dCD4+T淋巴细胞计数均显著低于脓毒症非MODS组(P均<0.05)。
2.第0、1、3d淋巴细胞计数、第0、3dT。淋巴细胞计数、第0、3dCD4+T淋巴细胞计数和第0-3dAPACHEⅡ评分、SOFA评分均可预测7天内MODS的发生(P均<0.05),预测效率:淋巴细胞计数0d>APACHEⅡ2d>APACHEⅡ3d>SOFA3d>APACHEⅡ0d>SOFA0d>SOFAld>T淋巴细胞计数0D>淋巴细胞计数1d>CD4+T淋巴细胞计数0d>SOFA2d>APACHEⅡ1d>淋巴细胞计数3d>CD4+T淋巴细胞计数3d>T淋巴细胞计数3d。
3.死亡组第0、1、3、7dCD4+T淋巴细胞计数均显著低于存活组(P均<0.05);第0d血浆Cyt-c浓度、第0-7dAPACHEⅡ评分和第1-4、6、7dSOFA评分均显著高于存活组(P均<0.05)。
4.第0、1d淋巴细胞计数,第0、1dT淋巴细胞计数和第0、1、7dCD4+T淋巴细胞计数、第0d血浆Cyt-c浓度和第0-7dAPACHEⅡ评分、第1-3dSOFA评分均可预测28d内生存情况(P均<0.05)。预测效率依次为:预测效率依次为:APACHEⅡ3d>APACHEⅡ2d>SOFA1d>淋巴细胞计数0d>APACHEⅡ1d>CD4+T淋巴细胞计数7d>APACHEⅡ7d>APACHEⅡ4d>APACHEⅡ6d>T淋巴细胞计数0d>SOFA2d>T淋巴细胞计数1d>SOFA3d>APACHEⅡ5d>血浆cyt-c浓度0d>CD4+T淋巴细胞计数1d>APACHEⅡ0d>CD4+T淋巴细胞计数0d>淋巴细胞计数1d。
5.血浆Cyt-c浓度(第0d)与T淋巴细胞/淋巴细胞比值(第0、1、3、7d)呈显著负相关(P均<0.05)。
6.第0天血浆Cyt-c浓度与第1天APACHEⅡ评分呈明显正相关关系,外周血淋巴细胞、T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞计数与APACHEⅡ评分、SOFA评分呈显著负相关。
7.入选时即刻(0d)各有意义的预测指标确定最佳截断点,用Youden指数(Ⅵ)进行综合评价其预测准确度,对预测7d内MODS,YI从大到小依次为:PC62.5%、、T淋巴细胞计数53.6%、CD4+T淋巴细胞计数53.2%、淋巴细胞计数51.5%、APACHEⅡ评分41.4%、SOFA评分31.4%;对预测28天内生存情况,YI从大到小依次为:淋巴细胞计数56.7%、T淋巴细胞计数53.3%、CD4+T淋巴细胞计数45.7%、APACHEⅡ评分43.6%、Cyt-c30%。
8.淋巴细胞Caspase-3活性在在死亡组和存活组、脓毒症非MODS组和脓毒症致MODS组之间差异无统计学意义,目前未能证实淋巴细胞裂解液中Caspase-3活性可作为预测脓毒症患者不良临床结局的预警指标。
结论:
1.脓毒症患者早期监测血浆IL-6、IL-10和血小板计数对预警脓毒症致MODS具有重要价值。
2.早期监测脓毒症患者外周血淋巴细胞及其亚群可以较准确地预警7天内MODS发生和28天生存情况。
3.血浆Cyt-c可以预警脓毒症患者28天生存情况。
4.与APACHEⅡ评分、SOFA评分比较,外周血淋巴细胞及其亚群和PC预测效力和准确度较高而血浆Cyt-c偏低,但Cyt-c作为一个新的指标值得进一步关注。