热化疗对口腔鳞癌细胞CRT及HMGB1表达影响的实验研究

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研究目的:探究热疗(hyperthermia,HT)联合平阳霉素(pingyangmycin,PYM)化疗对口腔鳞癌CAL27、SCC-15及Tca8113细胞凋亡、细胞膜表面钙网蛋白(calreticulin,CRT)表达及高迁移率族蛋白B1(high mobility group box protein1,HMGB1)分泌的影响。研究方法:1.将细胞分组:(1)对照组:常规培养细胞,不经任何处理;(2)化疗组:工作浓度PYM处理细胞24h,37℃恒温培养;(3)热疗组(42℃):细胞置于42℃培养箱60min后,放回至37℃复温培养24h;(4)热化疗组(PYM+42℃):工作浓度PYM处理细胞并置于42℃培养箱60min后,放回至37℃复温培养24h。3株细胞均采用统一处理时间。2.采用CCK-8细胞增殖实验确定PYM工作浓度,以此浓度化疗或与热疗联合。3.采用Annexin V/PI联合染色及流式细胞术检测不同处理对细胞凋亡的影响。4.采用流式细胞术检测不同处理对细胞膜表面CRT表达的影响。5.采用ELISA试验检测不同处理对HMGB1分泌的影响。研究结果:1.PYM工作浓度的确定:根据PYM作用24h对CAL27、SCC-15及Tca8113细胞的半数抑制浓度(IC50)分别选定5μg/mL、5μg/mL及20μg/mL为工作浓度,以此浓度化疗或与热疗联合。2.不同处理对口腔鳞癌细胞凋亡的影响:经单纯热疗、单纯化疗及热化疗处理后细胞凋亡比例较处理前均升高;热化疗组(PYM+42℃)细胞凋亡比例显著高于单纯化疗组及单纯热疗组。3.不同处理对口腔鳞癌细胞膜表面CRT表达的影响:经单纯热疗、单纯化疗及热化疗处理后CRT在细胞膜表面的表达均升高,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);热化疗组(PYM+42℃)细胞膜表面CRT表达率较单纯化疗组及单纯热疗组均升高明显,差异有统计学意义(P<0.05)。4.不同处理对口腔鳞癌细胞分泌HMGB1的影响:经单纯热疗、单纯化疗及热化疗处理后HMGB1分泌均增多,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);热化疗组(PYM+42℃)HMGB1分泌量较单纯化疗组及单纯热疗组均升高明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:热疗、PYM化疗及热化疗联合均可在诱导口腔鳞癌CAL27、SCC-15和Tca8113细胞凋亡的同时,促使CRT在细胞膜表面表达,并促进HMGB1的分泌。热化疗联合在凋亡诱导及促进细胞膜表面CRT表达与HMGB1分泌方面效果明显优于单纯热疗组及单纯化疗组。
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