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目的:鼻咽癌起源于鼻咽粘膜上皮,是头颈肿瘤中具有鲜明流行病学、组织病理学、临床和治疗学特征的一种恶性肿瘤。放射治疗是其主要的根治性治疗手段。近年来调强放射治疗技术的广泛应用显著提高了鼻咽癌的治愈率,但是仍有约20%患者因放射抗拒导致肿瘤局部区域复发。考虑到放疗在鼻咽癌治疗中的重要地位,如何增加鼻咽癌的放疗敏感性,开展鼻咽癌放疗抵抗的分子机制研究,为放射治疗提供增敏靶点,具有重要的理论与临床意义。近年来多项研究发现LZTS2在人类肿瘤的发生发展中起着关键作用,可能是一个潜在的肿瘤抑癌基因。PI3K/AKT信号通路在细胞的生长、增殖、分化和存活中起着关键作用,且通过对鼻咽癌突变图谱的研究,发现除EBV感染外,PI3K信号通路的激活与鼻咽癌的发生发展关系密切。本课题前期研究发现LZTS2蛋白与PI3K的调节亚基p85蛋白之间有相互作用。然而LZTS2蛋白是否通过与p85相互作用影响PI3K/AKT信号通路;LZTS2在鼻咽癌中发挥怎样的生物学功能以及是否影响鼻咽癌细胞的放疗敏感性均未有报道。本研究目的在于探讨LZTS2在鼻咽癌中的功能及相关机制研究。方法:Western blot检测LZTS2在人正常鼻咽上皮细胞和鼻咽癌细胞株中的表达情况。通过对鼻咽癌组织芯片进行免疫组织化学染色并进行生存分析,研究LZTS2的表达和鼻咽癌患者的预后关系。运用串联亲和纯化和质谱(TAP/MS)的方法筛选出与LZTS2有相互作用的候选蛋白,其中p85是可能与其结合的蛋白。运用免疫共沉淀的方法,验证LZTS2与p85之间的相互作用。进一步机制研究探讨LZTS2抑制PI3K活性的机制,LZTS2过表达或干扰后对PI3K下游信号通路重要蛋白的影响。功能学研究通过si RNA技术靶向沉默LZTS2,探讨LZTS2对鼻咽癌细胞生长、增殖和细胞周期的影响;以及LZTS2对放疗诱导的G2/M期阻滞的影响、对放疗后M期比例变化的影响。运用克隆形成实验及γ-H2AX焦点实验探究LZTS2对鼻咽癌放疗敏感性的影响,并在动物水平上进行了验证。通过rescue实验验证LZTS2发挥生物学功能是否依赖于p85。结果:Western blot结果显示与人正常鼻咽上皮细胞NP69相比,LZTS2在鼻咽癌细胞株中的表达相对较低。鼻咽癌组织芯片免疫组化染色显示LZTS2为核染色,且LZTS2高表达患者预后较好,低表达患者预后差。串联亲和纯化和质谱(TAP/MS)结果表明LZTS2可能与PI3K的调节亚基p85相互结合,免疫共沉淀结果进一步验证了LZTS2与p85之间的相互作用,并且LZTS2与p110竞争性结合p85,负向调控PI3K/AKT信号通路。靶向沉默LZTS2后:鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的生长、增殖明显加快,S期比例增加;放疗后G2/M期比例增加,对放疗敏感的M期细胞比例减少,对放疗的敏感性下降,增加了放疗抵抗。动物实验结果也表明靶向沉默LZTS2后,裸鼠移植瘤生长速度加快,且对放疗的敏感性下降。通过rescue实验证实LZTS2发挥生物学功能依赖于p85。结论:LZTS2在鼻咽癌细胞系中的表达均低于鼻咽上皮NP69细胞,且免疫组化与生存分析表明LZTS2表达和鼻咽癌患者预后呈正相关。LZTS2通过与p85相互作用,抑制了鼻咽癌中PI3K/AKT信号通路,增加鼻咽癌细胞的放疗敏感性。