目的:一、通过建立同种异体大鼠的角膜移植实验模型,探讨CD25-siRNA基因治疗能否抑制角膜移植免疫排斥反应,及其机制是否与调节Treg/Th1细胞因子的表达有关。二、通过建立同种异体小鼠的高危角膜移植实验模型,探讨CD25单抗、雷帕霉素的效应是否与DC细胞、Treg细胞的调节有关。方法:一、Wistar大鼠作为供体,SD大鼠作为受体,构建大鼠的角膜移植模型。将术后大鼠随机分为3组,分别为移植对照组、无义siRNA转染组和CD25-siRNA转染组。术后1周后开始,每天对植片行临床评分。于术后14天行HE染色检测角膜组织病理情况,行免疫组化检测IL-10、TGF-β、IFN-γ、IL-1β、TNF-α和Foxp3因子的表达。分别于术后3、7、14、21天行流式检测术后大鼠外周血中CD4+T细胞的比例。二、C57BL/6小鼠作为供体,Balb/c小鼠作为受体,受体右眼角膜缝线后2周行穿透性角膜移植手术,构建小鼠的高危角膜移植模型。将术后小鼠随机分为4组,分别为移植对照组、CD25单抗组、雷帕霉素组和cd25单抗联合雷帕霉素组。于术后12天行he和dc细胞的免疫组化。术后第12天应用流式细胞仪分析各组小鼠引流淋巴结、脾脏中cd4+t,treg细胞,dc细胞的比例;应用qrt-pcr分析各组植片和引流淋巴结中细胞因子(ifn-γ、il-2、il-1β和tgf-β)的mrna表达水平。术后4周内每日观察角膜植片的存活情况。结果:一、在wistar—sd大鼠低危角膜移植模型中,与移植对照组、无义cd25sirna转染组相比,cd25sirna转染组植片浑浊、水肿及新生血管化指标的评分减低,角膜植片的存活时长显著增加(p<0.05)。术后第14天免疫组化显示,cd25-sirna转染组的il-10、tgf-β的表达高于另外两组;ifn-γ、tnf-α和il-1β的表达低于另外两组;而foxp3的表达三组之间无显著差异。术后3、7、14、21天,对照组外周血cd4+t淋巴细胞亚群比例逐渐增加,而cd25-sirna转染组的每个时间点,cd4+t细胞的比例都低于对照组(p<0.05)。二、在c57bl/6—balb/c小鼠高危穿透性角膜移植模型中,与对照组相比,干预组植片的存活时长显著增加(p<0.05)。术后第12天,cd25单抗组、雷帕霉素组和cd25单抗联合雷帕霉素组3组植片的炎症减轻,dc细胞在植片的分布减少,引流淋巴结中dc细胞和cd4+t细胞所占比例减少。雷帕霉素组淋巴结的treg细胞比例高于对照组,cd25单抗组低于对照组,而联合干预组treg细胞保持在对照组的一致水平。术后12天于对照组相比,3组干预组植片的ifn-γ、il-2、il-1βmrna明显降低,此外,cd25单抗组、cd25单抗联合雷帕霉素组的TGF-βmRNA显著升高。结论:一、下调表面分子CD25的表达能有效抑制角膜移植排斥反应的发生,延长角膜植片的存活时间。二、CD25的下调减轻排斥反应的机制,可能通过增加IL-10、TGF-β的表达,降低IFN-γ、IL-1β和TNF-α的表达来完成。三、CD25的下调减轻排斥反应的机制还可能通过抑制DC细胞成熟、迁移有关。