【摘 要】
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以‘瓯柑’(Citrus suavissima Hort.ex Tanaka)及其无子突变体‘无子瓯柑’为试材,切片观察其小孢子的发育过程,压片观察小孢子母细胞减数分裂过程中染色体的行为,并克隆到
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以‘瓯柑’(Citrus suavissima Hort.ex Tanaka)及其无子突变体‘无子瓯柑’为试材,切片观察其小孢子的发育过程,压片观察小孢子母细胞减数分裂过程中染色体的行为,并克隆到两个可能与‘无子瓯柑’雄性不育相关的基因:Cs LTP和Cs LOX,应用荧光定量PCR技术对这两个基因在花药发育过程中的时空表达情况进行研究。主要研究结果如下:1、对‘瓯柑’及其无子突变体的花粉形态和花药发育过程进行观察研究,发现‘无子瓯柑’花粉母细胞是正常的,花粉败育开始于小孢子母细胞减数分裂期至四分体时期,小孢子母细胞减数分裂过程的不正常是导致‘无子瓯柑’花粉败育的主要原因。2、采用卡宝品红压片法研究‘无子瓯柑’及有子瓯柑花粉母细胞减数分裂时期的染色体行为。结果表明:‘无子瓯柑’花粉母细胞减数分裂过程中染色体出现较多异常现象,在花粉母细胞减数分裂后,异常四分体的比例约为57.8%,而有子瓯柑只有8.0%。这进一步说明小孢子母细胞减数分裂期间染色体行为的异常,是导致‘无子瓯柑’花粉败育的主要原因。3、采用同源序列法,结合c DNA末端快速扩增技术,克隆获得‘无子瓯柑’脂转移酶(Cs LTP)基因和‘无子瓯柑’脂氧合酶(Cs LOX)基因的全长c DNA序列:Cs LTP c DNA全长667bp,包含1个开放阅读框,编码215个氨基酸,与脐橙C.sinensis,粗柠檬C.jambhiri的脂转移蛋白的相似性分别为99%和60%;Cs LOX c DNA全长2915bp,包含1个开放阅读框,编码895个氨基酸,与粗柠檬C.jambhiri、美洲黑杨Populus deltoids的相似性分别为99%和51%。4、通过荧光定量PCR技术,对Cs LTP和Cs LOX在花粉发育不同时期的m RNA表达量进行实时定量分析,结果表明:基因Cs LTP和Cs LOX的表达量均在‘无子瓯柑’花粉粒形成期开始明显下降,并显著低于有子瓯柑。‘无子瓯柑’花粉发育过程中油脂的转运及氧化的异常,可能是‘无子瓯柑’花粉败育的原因之一。
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