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该研究根据已发表的家鸡Myostatin基因cDNA序列,设计并合成一对特异性引物,分别从狮头鹅、阳江鹅和乌鬃鹅23日龄胚胎中分离大腿肌肉组织,按Invitrogen公司的Trizol试剂盒提供的方法快速抽提总RNA.并分别以此RNA为模板,经反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得了特异性片断,并将该片断克隆入pUCm-T载体并转化感受态细胞Ecoli.DH5α.将含有外源片断的克隆质粒经PCR、酶切和测序验证.测序结果显示,鹅MSTN基因cDNA全长1128bp,编码375个氨基酸的蛋白质.将测序正确的三个品种的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行比较,结果表明,不同品种间核苷酸序列同源性介于99.7%-99.9%之间,其中狮头鹅和阳江鹅的同源性最高,只有1个核苷酸的差异(C84G);推导的氨基酸序列中同源性介于98.9%-99.5%之间,也是狮头鹅和阳江鹅的同源性最高,只有1个氨基酸的差异(His28Gln).三品种MSTN成熟肽cDNA核苷酸序列和氨基酸序列完全相同.鹅MSTN基因cDNA与其它禽类相比,同源性在90%以上,与人的同源性达87%,和家畜相比有85%以上的同源性,.对推导的氨基酸序列用GORⅣ软件进行二级结构预测发现,狮头鹅第28位氨基酸和阳江鹅第788位氨基酸的变化改变了二级结构,但是其疏水性—亲水性曲线没有明显区别,Rasmol(2.7)软件预测的三级结构也没有明显区别.最后将MSTN成熟肽cDNA序列插入到表达质粒pRSETA的BamHⅠ和SacⅠ克隆位点之间,构建重组质粒pMSTNSCAU(单体).然后利用质粒上的位于SacⅠ下游的BamHⅠ的同尾酶Bg/lⅡ,构建内含MSTN成熟肽cDNA重复二次的重组质粒pMSTN2 SCAU(二聚体).将两重组质粒转化入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)株,在IPTG诱导下分别表达出分子量约为18kDa的单体和31kDa的二聚体MSTN融合蛋白,最高表达量分别达菌体蛋白质的20.48%和5.52%,两蛋白都可用Ni-NTA凝胶层析纯化.用兔抗鸡MSTN抗体进行的免疫印迹分析结果证明所表达的两种蛋白为MYSN融合蛋白.以上结果证明该研究成功克隆了三种鹅肌肉生长抑制素编码区cDNA并依此成功构建、表达和纯化了MSTN成熟肽单体和二聚体的融合蛋白,可以用作免疫促进动物的肌肉生长的基因工程疫苗.