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Poly Ⅰ:C诱导负载HPV E744-62多肽脐血DCs体外抗宫颈癌的免疫效应研究目的：观察Poly Ⅰ:C诱导负载HPV E744-62多肽的人脐血DCs体外抗宫颈癌的免疫效应。方法：采集健康足月妊娠孕妇的脐带血,密度梯度离心法分离获得脐血单个核细胞,取贴壁细胞体外经rhGM-CSF、rhIL-4诱导培养7天获DCs。分别用Poly Ⅰ:C、HPV16E744-62多肽、Poly Ⅰ:C联合HPVl6E744-62多肽来刺激DCs,设未经抗原负载的DCs作为对照组。观察细胞形态,收集培养9天的各组DCs,采用流式细胞仪检测DCs相关表型：CDl α、HLA-DR、CD40和CD83;ELISA法检测DCs上清中IL-12、IL-10的含量,混合淋巴细胞反应测定各组DCs体外刺激T细胞增殖的能力,ELISA法检测T细胞培养上清液中的IFN-γ含量,MTT法检测CTL对宫颈癌细胞系CaSki和肝癌细胞系HepG2的杀伤效应。结果：各组DCs均可诱导分化为一定数量的具有典型形态和表型的DCs。以HPV16E74462多肽联合Poly Ⅰ:C组最高。与未经抗原负载的DCs相比,其他各组抗原刺激的DCs数量、表型CD1α、HLA-DR、CD40和CD83表达率、分泌IL-12的能力、刺激同种异体T细胞增殖能力、分泌IFN-Y水平及激活的CTL对CaSki细胞杀伤力均较高,尤其是以HPV16E744-62多肽联合Poly Ⅰ:C组效果最明显,同时其分泌IL-10水平亦最低。而此类CTL对HepG2细胞无特异性杀伤效应。结论：负载HPV16E744-62多肽的脐血DCs体外可诱导特异性杀伤宫颈癌细胞的免疫效应,Poly Ⅰ:C作为免疫佐剂可增强抗肿瘤免疫反应。第二章Poly Ⅰ:C诱导负载HPV E744-62多肽脐血DCs体内抗宫颈癌的免疫效应研究。目的：观察Poly Ⅰ:C诱导负载HPV E744-62多肽的人脐血DCs对T细胞免疫重建荷人宫颈癌裸鼠的肿瘤生长的影响。方法：对裸鼠经尾静脉射入宫颈癌患者T淋巴细胞进行细胞免疫重建,24h后皮下注射人宫颈癌细胞系CaSki细胞,建立荷瘤裸鼠模型。荷瘤1周后根据注射疫苗不同将裸鼠分为5组：皮下注射各组DCs疫苗：Ctrl组（未负载抗原的脐血DCs）、E组（负载HPV16E744-62多肽的脐血DCs）、P组（单独PolyⅠ:C刺激脐血DCs）、E+P组（HPVE744-62多肽联合PolyⅠ:C诱导脐血DCs）,NS组（设皮下注射生理盐水作为空白对照组）。2周后再次接种疫苗强化1次。观察荷瘤裸鼠一般生物学特性、成瘤率、成瘤潜伏期、肿瘤大小及其生存期。荷瘤后35天检测裸鼠血中人CD3+、CD4+、CD8+T细胞比率及血中人IFN-γ水平。结果：裸鼠成瘤率为100%,成瘤潜伏期为5-8天。各组均可检测到人CD3+/CD4+、CD3-/CD8+T细胞,说明裸鼠T细胞免疫重建成功。与空白对照比较,其他各组裸鼠血中人CD3+/CD4+、CD3+/CD8+T细胞阳性率及IFN-γ水平均有升高,且有较高的抑瘤率和较长的生存时间,尤其以E+P组最为明显。结论：PolyⅠ:C诱导负载HPV16E744-62多肽的脐血DCs可以在人T细胞免疫重建荷人宫颈癌裸鼠模型体内诱发出抗肿瘤免疫反应。