前言 重型肝炎是我国常见的急、危重疾病，死亡率高达65％～90％。感染是常见的并发症，也是造成患者死亡的重要原因之一。抗生素可以控制感染，长期大剂量使用使得细菌耐药现象不断增加。不仅如此，抗生素在杀灭病原菌的同时，也可以造成肠道菌群失调。 导致重型肝炎病人出现感染的病原菌大都来源于肠道内的正常菌群。这些细菌在生理条件下定植于肠道内，并在种群和数量上保持相对稳定。重型肝炎的发病过程中存在肠道菌群失调，表现为粪便中的双歧杆菌等有益菌下降，肠杆菌科细菌过度生长。肠道菌群失调是造成细菌易位、细菌感染的重要因素，研究肠道菌群的失调可以进一步了解细菌易位和感染的规律，建立预防细菌感染的微生态学方法。本实验采用大鼠肝衰竭模型，研究不同部位肠道菌群、内毒素的动态变化及消长关系。 浙江大学2003届硕士研究生学位论文 材料和方法1．实验动物 雄性SD大鼠40只，体重200刁，由浙江省医学动物中心提供。动物随机分为对照组和急性肝功能衰竭组。对照组门0只，A组）在实验开始时处死；急性肝衰竭组分别在造模完成后24小时 （12只，B组）不 48河时（18只，C组）处死。2．主要材料和方法 半乳糖胺购于重庆医科大学生化教研室，配制成 20％溶液，IM的 NaOH调 pH至 7．0。按 1．4g／kg剂量间隔 12小时腹腔注射半乳糖胺两次建立急性肝衰竭大鼠模型。按本实验室现行方法要求下列培养基，E棚、EC、TS、EG、NBGT、LBS。3．标本采集，细菌培养和内毒素测定 采右心室血检测肝功能和内毒素；采门静脉血检测内毒素。无菌条件下采集空肠、回肠及结肠内容物。稀释后用于肠道内毒素测定，并进行细菌培养计数。采用细菌三级鉴定法将细菌鉴定到属的水平。4．统计学分析 数据采用均数士标准差表示。根据不同情况采用X’检验。单因素方差分析和秩和检验。 实验结果和讨论1．大鼠死亡率观察A组大鼠全部存活。B组大鼠死亡一只，死亡时间为 16～24小时之间，其余大鼠在处死前均有不同程度的精神萎靡，进食减少，反应迟钝。C组大鼠在24～48小时之间死亡8只；在处死前，l只大鼠出现狂躁，激惹等症状，处于兴奋状态；4只大鼠在40小时后 浙江大学2003届硕士研究生学位论文出现精神好转，嗜睡症状消失，饮食增加并伴随活动增加：其余大鼠处死前也伴有不同程度的精神萎靡，进食减少和反应迟钝。2．肝功能检查结果 肝功能检测结果见表一： 表一 肝功能检测结果 A组（n－10） B组…＝11）C组（n—10） 总蛋白（g／L）62．7i4．5 48．9t3．7“”51．8t9．7＊＊ 白蛋白（g／L）343t2．4 27．8t2刀’”303t34＊＊ 球蛋白（gb）28．6f2厂 ZI．113二’”ZI．5t8月＊＊ ALT山几）60．6士门 4798对土3341刀“”3183土3973”“ AST（U／L）138刀“24．8 5033刀“32010“”29280“2666刀”” 碱性磷酸酶（U／L）272二土引．5 639二1179．8＊＊747t421＊＊ 总胆汁酸（umol／U．8比j425．0土994’“262．0川83．O““人 总胆红素（umol／L）7if．5 40石t24石””63二t58二““注：＊＊表示与A组有显著差异（p＜001）人表不与B组差异（p＜005） 肝功能检测显示，造模后B、C两组大鼠肝脏出现严重损伤：总蛋白、白蛋白和球蛋白明显下降：＊ST、＊LT、碱性磷酸酶、总胆红素和总胆汁酸出现明显升高。实验中，C组大鼠因肝衰竭大量死亡，存活的部分大鼠在处死时临床症状有所好转。结合肝功能结果综合进行判断后认为：C组大鼠的肝功能开始出现好转。3．肠道菌群分析3．l肠杆菌科细菌计数见表H： 表二 肠道肠杆科细菌定量分析 A组（n＝10）B组（n＝11）C组（n。10） 空肠 （lgCfu／肠段）3．610．5（80％）5．110厂（73％）‘”4．310．9（80％）面 回肠 （lgCfu／肠段）5．3ti刀（90％）6．911．4（100％）””6．311．5（90％） 结肠内容物（lgCfu／粪便）7名土04（100％）8．7f0厂（100％）“7．gll刀（100％）凸3．2肠球菌计数见左： 4 浙江大学2003届硕士研究生学位论工 表三 肠道肠球菌细菌定量分析 A组（n一川）B绢（n＝11）C组（n＝10） 空肠门gC呐肠段）3．肚0石（80％）3．9土队5（82％）3石出．7（80％） 回肠（lgCfuj肠段）4．gll．l（100％）5．710．9（100％）5二土14（90％）