肠道是体内菌群定植的主要场所,人体肠道菌群种类多且数量特别巨大。正常肠道菌群是机体的天然保护屏障,对维持人类身心健康尤为重要。通常在健康人体内肠道菌群保持一种动态平衡,机体内外环境的变化都有可能打破这种平衡,从而引发或加重疾病,对人类的健康造成严重的影响。故研究肠道菌群的定植及其影响因素非常重要。那么肠道菌群何时定植于肠道?胚胎时期胃肠道到底有没有细菌的定植?这一系列的问题尚不明确。为了解决以上问题,本研究首先把不同孕期小鼠胚胎胃肠道组织菌群和孕晚期小鼠胎盘组织菌群进行高通量测序,探讨小鼠胚胎胃肠道和胎盘组织菌群。其次把孕晚期胚胎胃肠道组织菌群和生后三天仔鼠胃肠道组织菌群进行高通量测序,了解母乳对胃肠道菌群的影响。最后对孕晚期不同窝别小鼠胚胎胃肠道组织菌群和孕晚期同一窝别小鼠胚胎胃肠道组织菌群进行高通量测序,探讨宿主基因型对胃肠道菌群的影响。正常菌群在人体内环境的定植与繁殖是宿主长时间进化的必然结果。早期肠道菌群的建立与人类的健康密切相关,因此对胚胎胃肠道菌群的研究就显得尤为重要。目的探讨小鼠胚胎胃肠道和胎盘组织的菌群多样性及构成,研究母乳和宿主基因型对小鼠胃肠道菌群的影响。方法1、小鼠胚胎胃肠道和胎盘组织菌群多样性及构成的研究。实验共采集了昆明孕鼠的胚胎组织24份,分别为孕早期(孕12-13天)胚胎胃肠道组织8块,孕晚期(孕19-20天)胚胎胃肠道组织8块和孕晚期(孕19-20天)胎盘组织8块。应用DNeasy Blood&Tissue kit提取胃肠道组织菌群和胎盘组织菌群的DNA,然后将24个样本所提取的DNA进行高通量测序。2、母乳对小鼠胃肠道菌群的影响。实验共采集了16份组织标本,分别为孕晚期(孕19-20天)胚胎胃肠道组织8块和生后3天仔鼠胃肠道组织8块。应用DNeasy Blood&Tissue kit提取胃肠道组织菌群的DNA进行高通量测序。3、宿主基因型对小鼠胃肠道菌群影响。分别采集孕晚期(孕19-20天)不同窝别胚胎胃肠道组织8块和孕晚期(孕19-20天)同一窝别胚胎胃肠道组织8块。应用DNeasy Blood&Tissue kit提取胃肠道组织菌群的DNA进行高通量测序。结果1、小鼠胚胎胃肠道和胎盘组织菌群多样性及构成的研究。研究发现(1)Alpha多样性分析显示孕早期胚胎胃肠道组菌群的多样性明显较低。(2)Beta多样性分析显示孕晚期胚胎胃肠道组和孕晚期胎盘组菌群的多样性差异较小。(3)菌群结构上分析,实验所取标本的菌群在“门”水平有4个优势菌群,分别是变形菌门、拟杆菌门、放线菌门及厚壁菌门。孕早期胚胎胃肠道组在变形菌门、放线菌门和厚壁菌门的相对含量与孕晚期胚胎胃肠道组和孕晚期胎盘组有差异(P<0.05)。而孕晚期胚胎胃肠道组、孕晚期胎盘组在四个优势菌门的相对含量无明显差异(P>0.05)。在科水平有9个优势菌科,其中三组在优势菌肠杆菌科、希瓦氏菌科、莫拉氏菌科的相对含量无明显差异(P>0.05)。而孕早期胚胎胃肠道组在次要优势菌葡萄球菌科、假单胞菌科、柄杆菌科、微球菌科和鞘氨醇单胞菌科的相对含量与孕晚期胚胎胃肠道组和孕晚期胎盘组有差异(P<0.05)。孕晚期胚胎胃肠道组与孕晚期胎盘组仅在次要优势菌鞘氨醇单胞菌科的相对含量有差异(P<0.05)。从菌群的种类上看,孕早期和孕晚期胚胎胃肠道菌群分别有65.44%和62.73%与孕晚期胎盘组织菌群相同。从菌群的丰度上看,在“科”水平,三组相同菌群的含量所占的比例分别为78.16%、72.53%及65.78%,说明三组中有约三分之二的菌群是一致的。2、母乳对小鼠胃肠道菌群影响。本研究发现在菌群多样性分析中,生后3天仔鼠胃肠道组的菌群多样性与孕晚期胚胎胃肠道组的菌群多样性差异较大。在菌群结构分析中,胚胎期胃肠道的优势菌在胎鼠出生后含量明显减少,而在胚胎期胃肠道菌群含量很低的巴斯德氏菌科、乳杆菌科和链球菌科在母乳喂养后含量明显升高。3、宿主基因型对小鼠胃肠道菌群影响。研究显示:(1)孕晚期同一窝别胚胎胃肠道组菌群的种类明显丰富于孕晚期不同窝别胚胎胃肠道组。(2)孕晚期同一窝别胚胎胃肠道组内样本之间的菌群结构相似,不同窝别胚胎胃肠道组内样本之间的菌群结构相似性低。(3)孕晚期不同窝别胚胎胃肠道组和孕晚期同一窝别胚胎胃肠道组菌群结构存在明显差异。在“门”水平,变形菌门、拟杆菌门、放线菌门和厚壁菌门这四个优势菌门的相对含量有显著性差异(P<0.05)。在“科”水平,柄杆菌科、微球菌科、葡萄菌科的相对含量也有明显差别(P<0.05)。结论1、胚胎期胃肠道和胎盘组织已有菌群定植,胚胎期胃肠道菌群来源于母体。2、母乳喂养和宿主基因型均是影响胃肠道菌群的重要因素。