论文部分内容阅读
目的：检测C6胶质瘤细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1以及骨髓间充质干细胞中单核细胞趋化蛋白-1受体CCR2的表达情况，并探讨单核细胞趋化蛋白-1/CCR2途径是否参与趋化骨髓间充质干细胞向胶质瘤细胞的迁移。方法：1.购买SD雄性大鼠，取股骨与胫骨，分离骨髓间充质干细胞，通过免疫细胞化学检测骨髓间充质干细胞表面标记；2.购买C6胶质瘤细胞，进行传代培养；3.收集C6胶质瘤细胞条件培养液，-20℃保存备用；4.通过PCR对C6胶质瘤细胞中单核细胞趋化蛋白-1的DNA进行定性检测；ELISA检测C6胶质瘤细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1的情况；5.通过PCR对骨髓间充质干细胞中单核细胞趋化蛋白-1受体CCR2的DNA进行定性检测，免疫细胞化学从蛋白质水平检测骨髓间充质干细胞中单核细胞趋化蛋白-1受体CCR2的表达；6.应用Transwell体外迁移体系检测骨髓间充质干细胞向C6胶质瘤细胞的迁移效果，实验分三组：A组（C6胶质瘤细胞条件培养液组），B组（C6胶质瘤细胞条件培养液组+单核细胞趋化蛋白-1抗体），C组（无血清LG-DMEM培养液组），计数各组迁移至Transwell趋化板下室中的骨髓间充质干细胞数，统计学分析各组迁移至Transwell趋化板下室中的骨髓间充质干细胞数的差异。结果：1.免疫细胞化学检测骨髓间充质干细胞表面标记表达，结果显示CD45呈阴性表达，细胞核呈蓝色，细胞质与细胞膜未着色；CD44/CD90/CD105均呈阳性表达，细胞核呈蓝色，细胞质与细胞膜呈棕黄色；2.PCR对C6胶质瘤细胞中单核细胞趋化蛋白-1的DNA进行定性检测，结果显示在658bp处有一条亮带出现，符合单核细胞趋化蛋白-1基因长度；ELISA检测C6胶质瘤细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1的情况，显示实验组与阴性对照组存在明显差异，P<0.05；3.PCR对骨髓间充质干细胞中单核细胞趋化蛋白-1受体CCR2的DNA进行定性检测，结果显示在409bp处有一条亮带出现，符合CCR2基因长度；免疫细胞化学检测骨髓间充质干细胞中单核细胞趋化蛋白-1受体CCR2的表达，显示CCR2两个亚型CCR2A与CCR2B均呈阳性表达，细胞核呈蓝色，细胞质与细胞膜呈棕黄色；4.Transwell趋化实验结果显示A组与B组比较，P<0.05，差异有统计学意义；A组与C组比较，P<0.05，差异有统计学意义。结论：1.原代培养的细胞为骨髓间充质干细胞；2.C6胶质瘤细胞可以分泌单核细胞趋化蛋白-1；3.骨髓间充质干细胞表达单核细胞趋化蛋白-1受体CCR2；4.单核细胞趋化蛋白-1参与趋化骨髓间充质干细胞向C6胶质瘤细胞的迁移。