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目的:通过建立靶向线粒体转录因子A(Mitochondrial Transcription Factor A,TFAM)和核呼吸因子1(Nuclear Respiratory Factor-1,NRF-1)的基因沉默(RNA interference,RNAi)大鼠入肝血流阻断模型,观察促肝细胞生长素(Promoting Hepatocyte Growth Factor,PHGF)在RNAi大鼠肝细胞内是否有保护作用,初步研究PHGF是否通过调控TFAM和/或NRF-1影响线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)合成,进而保护肝细胞线粒体功能。方法:第一步建立靶向NRF-1和TFAM的RNAi大鼠模型。设计RNAi模板序列,采用化学合成的方法合成小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA);利用lipofectamin2000转染siRNA至HSC-T6细胞,利用Real Time PCR及Western blot检测RNAi效果,根据结果筛选出最佳干扰效果siRNA;将最佳抑制活性的RNAi序列进行慢病毒包装;将慢病毒颗粒经大鼠尾静脉注入大鼠体内,测定肝细胞内TFAM、NRF-1 mRNA的含量,并与正常大鼠对照,观察RNAi效果。第二步建立入肝血流阻断下的RNAi大鼠模型,观察外源性PHGF对NRF-1和TFAM的表达的影响。实验中使用SD大鼠,靶向TFAM的RNAi大鼠,靶向NRF-1的RNAi大鼠,各组大鼠随机分为实验组、对照组,实验组术前30分钟及术后每日腹腔注射PHGF,对照组同时腹腔注射等量生理盐水,2组均进行入肝血流阻断(Pringle手法),阻断时间20min,术后大鼠各时相点(1d,3d,7d)肝功能、肝脏病理以及肝脏组织TFAM、NRF-1 mRNA的表达变化规律。各检测所得数据采用统计软件SPSS18.0做统计学处理。结果:(1)针对靶基因TFAM的三条干扰序列中T2序列和靶向NRF-1的N3序列干扰效果最佳;(2)两个有效干扰序列进行慢病毒包装成功后,进行大鼠活体RNAi实验,两种病毒都有效感染大鼠肝脏,并下调了靶基因表达量;(3)术后1d肝功能明显损害(ALT、AST、TB显著升高),肝脏病理提示均出现不同程度的淤血、结构破坏、细胞变性,基因沉默组大鼠(B组、C组)较正常组大鼠(A组)ALT、AST、TB值更高,实验组与对照组间无明显差别;随着术后恢复,各组大鼠肝功能ALT、AST、TB值均有下降,术后第7d,实验组较对照组ALT、AST、TB值下降更明显;(4)术后第1d靶向TFAM的RNAi大鼠肝脏组织TFAM mRNA较正常大鼠组下降更明显,靶向NRF-1的RNAi大鼠肝脏组织NRF-1 mRNA表达量较正常大鼠组下降更明显,三种大鼠实验组比对照组无明显差异;随着术后恢复,3d、7d后各组TFAM/NRF-1的mRNA表达量均有所回升,实验组表达量高于对照组,在最末时间点,基因沉默组大鼠靶基因的表达量升高幅度较正常组大鼠减低。结论:PHGF对靶向TFAM/NRF-1的RNAi大鼠入肝血流阻断后肝脏具有保护、促恢复作用,促进TFAM及NRF-1的表达是其发挥保护作用的重要途径。