分子印迹—荧光猝灭方法的建立及甲硝唑等药物的分析应用

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荧光猝灭分析法具有灵敏度高,选择性强,试样量少,仪器简单,快速测定等优点,为复杂的样品中微量待测物的分析及含量测定提供了重要手段。荧光猝灭法与分子印迹技术结合使用,为药物分析提供更加广阔的前景。本研究根据荧光猝灭法,比率荧光猝灭法,分子印迹技术-荧光猝灭法原理,对荧光敏感膜的制备进行了研究,利用将所制备的MPB固定化的荧光玻璃载片,MPB+AAF固定化的比率荧光玻璃载片测定了甲硝唑在人血清样品中的含量,及实现了甲硝唑浓度的快速测定。并且制备了分子印迹荧光敏感薄膜(MIP/CTA-MPB和NIP/CTA-MPB),建立了分子印迹-荧光猝灭原理测定甲硝唑含量的方法。主要内容包括如下:1.合成了荧光试剂芘丁酸的酯化物MPB及利用核磁氢谱,红外来对其结构进行表征。用带双键的荧光试剂MPB,通过化学键合法固定在玻璃基片上,制备了MPB固定化的荧光玻璃载片,并用于甲硝唑的快速测定,该荧光玻璃载片表现出良好的灵敏度和选择性。线性范围为1.23~35.48mg/L;检出限为0.36mg/L。荧光玻璃载片的性能测试实验发现,此玻璃载片具有良好的稳定性RSD1.78%(n=6),可逆再生性RSD2.42%(n=6)及使用寿命较长。一年之后此荧光玻璃片的荧光强度基本保持不变。本方法用于人类血清样品中甲硝唑含量的测定,回收率为84.63%~104.62%, RSD为0.99%~1.83%。2.从二氯荧光素,1-萘酚等9种荧光试剂中,以5-氨基荧光素选择为比率型荧光化合物,及合成了其可聚合的衍生物(AAF)。通过核磁共振和质谱对AAF结构进行表征。同时,将AAF和MPB通过化学键合法固定在玻璃基片上,制备了AAF+MPB固定化的比率荧光玻璃载片。此片对甲硝唑具有良好的选择性,荧光强度的减少程度(F525-F378)0/(F525-F378)为11.05,大大高于其他常见干扰药物所产生的比率,及使用于人血清中甲硝唑含量的检测,所得到的回归方程为Ln[(F525-F378)0/(F525-F378)]=0.031[MNZ]+0.015,相关系数为R2=0.987,血清样品加样回收率为92.2%~117.3%。荧光玻璃载片具有良好的稳定性,10个月之内荧光强度未发生显著变化,说明该膜具有较长的使用寿命。3.以甲硝唑酯化物(MNZ-Es)为模板分子,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,EDMA为交联剂,CTA为固相载体,可聚合的MPB为荧光单体制备了分子印迹-荧光敏感薄膜(MIP/CTA-MPB和NIP/CTA-MPB)。MIP/CTA-MPB薄膜的Ksv为0.033,NIP/CTA-MPB薄膜的Ksv为0.004,印迹系数K‵为8.25。4.合成了对硝基苯酚(4-NP)的可聚合酯化物NBAA,将此酯化物通过光聚合方式固定于聚苯乙烯96孔微量滴定板上,适用于a-胰凝乳蛋白酶的含量测定,线性方程为Y=0.2374X+0.1302(Y为吸光度值,X为a-胰凝乳蛋白酶的浓度),相关系数:R2=0.9880。
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