论文部分内容阅读
目的：HCAP1克隆于人类染色体17p13.3高频杂合缺失区。对其结构和功能、及其与肝癌和血液肿瘤关系的初步研究，提示为一侯选的抑瘤基因。HCAP1基因的过表达可明显抑制白血病细胞系的细胞活力、抑制其在软琼脂上的集落形成能力，并一定程度地诱导细胞凋亡。本研究拟在蛋白水平，检测HCAP1基因在正常白细胞和血液肿瘤细胞的表达；用更为敏感的荧光标记TUNEL法，证实HCAP1基因过表达对造血肿瘤细胞凋亡的作用；并对HCAP1过表达与凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的关系作初步的探讨。 方法：①用免疫组织化学方法和Western blot方法，检测正常人外周血白细胞和白血病病人原代白血病细胞的HCAP1蛋白表达。③用脂质体介导的方法，把HCAP1基因导入Jurkat和Raji细胞，Western blot方法验证外源基因在转染细胞的过表达。④用荧光标记的TUNEL加DAPI复染的方法，检测HCAP1基因过表达对Jurkat细胞凋亡的作用。⑤用western blot方法，检测HCAP1基因过表达对凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达水平的调节。 结果：①免疫组织化学方法发现，正常人外周血白细胞、白血病病人的原代白血病细胞均表达HCAP1蛋白，且均定位于细胞核。②免疫印迹方法显示，正常人外周血白细胞和白血病病人的原代白血病细胞，HCAP1蛋白水平并无差异(P＞0.05)。③Western blot检测显示，转染外源性HCAP1基因的Jurkat和Raji细胞，HCAP1蛋白的表达水平高于转染空载体及未作转染的对照细胞。④荧光标记的TUNEL方法发现，Jurkat细胞转染HCAP1基因24小时后，细胞凋亡率为26.67±3.88％， HCAPI基因在血液肿瘤中的表达及对细胞凋亡和 BaxfBcl－2表达的作用明显高于转染空载体的对照细胞（4．83士2．08％）（P＜0．of）。⑤Jurkat和 Ran细胞转染 HCAPI基因 24小时，Weste。n blot显示，Bax蛋白表达高于转染空载体和未转染的对照细胞，BC－2蛋白表达低于转染空载体和未转染的对照细胞。结论：①正常人外周血白细胞和白血病病人的原代白血病细胞均表达 HCAP蛋白，两者表达水平并无显著差异；②HCAP基因的过表达，可诱导Jurkat细胞的凋亡：③HCAPI基因的过表达，可上调 Jurkat和 Ran细胞促凋亡蛋白 Bax表达、下调抗凋亡蛋白仇12表达。HCAPI基因产物对Bax／Bcl－2蛋白的调节，可能是其诱导凋亡的分于机制之一。