当前水产业面临细菌性疾病的严重威胁,使用抗生素是防治水产动物细菌性疾病的主要手段,而滥用抗生素会导致病原菌产生耐药性,也会对环境造成污染。因此,使用一些新的方法来替代抗生素的使用成为当前防治细菌性疾病的热点研究。有研究表明,益生菌具有促进水产动物的生长和提高免疫力的作用。内源益生菌具有在机体中的定植能力强、对宿主和环境安全、改善肠道菌群结构、调节机体免疫等特性。因此,新型内源性益生菌的开发研究对水产养殖业的发展具有重要促进作用。本研究初步分析了鲫肠道菌群结构特征,并筛选和分离出无溶血性和对嗜水气单胞菌具有体外抑制作用的潜在益生菌,进一步通过在体安全试验予以安全性评估。后期通过潜在益生菌拌饲投喂鲫,研究其对鲫生长、生理、免疫抗病力及其肠道菌群结构的影响。取得结果如下:1.使用FWA培养基从鲫肠道分离菌株,根据菌落形态特征,按比例随机挑选36株进行16S rDNA测序鉴定,发现其中优势菌为气单胞菌属、芽孢杆菌属、邻单胞菌属、土芽孢杆菌属和肠杆菌属,所占比例分别为46.88%、34.38%、6.25%、6.25%和6.25%。36株从鲫分离的菌株中共16株菌无溶血性,其中有三株菌维氏气单胞菌C19、阿氏肠杆菌C28、特基拉芽孢杆菌C35对嗜水气单胞菌KS02具有拮抗作用。分别以2×10~6、2×10~7、2×10~8 CFU/m L三种浓度的C19、C28、C35注射正常鲫鱼,按每100 g鱼体重腹腔注射菌液0.5 m L,对照组注射等量生理盐水。连续观察10天后,所有菌株注射组以及对照组均未出现患病或死亡,表明三株菌均对鲫没有致病性。2.潜在益生菌对鲫生长、生理、免疫及抗病力的影响:将三种菌添加到常规鲫鱼饲料中,投喂鲫35天;期间每隔7天采集血液,测定血清生化指标;饲养结束后,测定生长状况,采集血液测定血液学指标,采集肝脏测定生化指标;每组随机取10尾鱼,腹腔注射嗜水气单胞菌,测定投喂菌株对鲫的免疫保护作用。结果显示,维氏气单胞菌C19投喂组的鲫体重、体长和全长均高于对照组,血清脂肪酶、淀粉酶、SOD和CAT活性显著增加,血清MDA含量显著降低,对被病原菌嗜水气单胞菌感染时能对鲫发挥较好的保护作用;特基拉芽孢杆菌C35在试验过程中显示出提高鲫血清溶菌酶、脂肪酶和肝脏谷丙转氨酶的作用,总体上对鲫的消化能力和免疫力具有促进作用。3.三株潜在益生菌对鲫肠道健康的影响:试验第35天,采集肠道样品用于测定肠道消化酶活性和制作中肠组织切片;无菌操作取出鲫中肠肠道内容物,提取微生物组总DNA并PCR扩增16S rDNA的可变区(V3+V4)后采用高通量测序技术分析了鲫肠道微生物群落结构。结果表明:投喂潜在益生菌维氏气单胞菌C19和阿氏肠杆菌C28能显著增加鲫肠绒毛高度;三株潜在益生菌均能提高鲫肠道中鲸杆菌属、Romboutsia和艾克曼菌属等有益菌的丰度,降低邻单胞菌属和假黄色单胞菌属等有害菌的丰度。综上表明,特基拉芽孢杆菌C35和维氏气单胞菌C19可以提高鲫的消化能力、抗氧化能力和免疫力,并能增加鲫肠道菌群中有益菌的丰度,降低有害菌的丰度,可以进一步作为益生菌开发利用。