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目的:研究阿魏酸拮抗人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)向肌成纤维细胞转分化的作用。方法:以HK-2细胞为研究对象,采用不同浓度(1、5、10 ng/mL)转化生长因子-b1(TGF-b1)刺激细胞不同时间(12、24、48、72 h),通过观察细胞形态及a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)荧光强度筛选出建立HK-2细胞转分化为肌成纤维细胞(模型细胞)的最适条件,即TGF-b1的浓度及时间。再予不同浓度(125mmol/L、250mmol/L、500mmol/L)阿魏酸干预模型细胞,显微镜下观察阿魏酸对模型细胞形态的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液纤维连接蛋白(Fn)、I型胶原蛋白(Col I)表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞α-SMA、整合素连接激酶(ILK)蛋白质表达水平;实时荧光定量(qPCR)方法检测α-SMA、Fn、Col I、ILK mRNA表达水平。结果:(1)10 ng/mL TGF-β1干预HK-2细胞24 h,细胞形态由椭圆形或多边形变为长梭形,形态改变最为明显,免疫荧光检测的α-SMA蛋白阳性信号表达最强。(2)阿魏酸对模型细胞形态的影响:对照组细胞为椭圆形或多边形;模型组细胞为长梭形;低、中、高剂量阿魏酸组,细胞形态趋向对照组。(3)阿魏酸对模型细胞α-SMA、Fn、Col I、ILK、α-SMA蛋白表达水平的影响:免疫荧光检测各组细胞α-SMA蛋白阳性信号,模型组阳性信号最强,低、中、高剂量阿魏酸组细胞的α-SMA蛋白阳性信号随阿魏酸浓度的增加而减弱。ELISA检测细胞上清液Fn、Col I蛋白表达水平:对照组、模型组、阿魏酸低剂量组、阿魏酸中剂量组及阿魏酸高剂量组Fn蛋白质表达水平分别为(138.57±14.99)pg/mL、(554.82±7.83)pg/mL、(491.16±9.69)pg/mL、(270.23±18.47)pg/mL、(195.99±5.91)pg/mL(P<0.01),Col I蛋白质表达水平分别为(1418.60±154.08)pg/mL、(6652.40±458.53)pg/mL、(5430.77±227.28)pg/mL、(4424.77±329.92)pg/mL、(2279.07±369.12)pg/mL(P<0.01)。Western blot检测细胞α-SMA、ILK蛋白表达水平:对照组、模型组、阿魏酸低剂量组、阿魏酸中剂量组及阿魏酸高剂量组α-SMA蛋白质表达水平分别为0.14±0.01、0.40±0.01、0.36±0.01、0.23±0.01、0.16±0.01(P<0.01),ILK蛋白质表达水平分别为0.14±0.02、0.46±0.02、0.38±0.01、0.33±0.01、0.29±0.01(P<0.01)。(4)阿魏酸对模型细胞α-SMA、Fn、Col I、ILK mRNA表达水平的影响:对照组、模型组、阿魏酸低剂量组、阿魏酸中剂量组及阿魏酸高剂量组α-SMA mRNA表达量分别为1.00±0.00、1.72±0.14、1.38±0.10、1.20±0.08、1.00±0.08(P<0.01),Fn mRNA表达量分别为1.00±0.00、2.96±0.21、1.95±0.15、1.69±0.13、1.26±0.05(P<0.01),Col I mRNA表达量分别为1.00±0.00、2.96±0.12、2.62±0.05、1.79±0.07、1.17±0.04(P<0.01),ILK mRNA表达量分别为1.00±0.00、2.31±0.16、1.78±0.11、1.55±0.11、1.29±0.09(P<0.01)。(5)ILK蛋白质表达水平与Fn、Col I、α-SMA蛋白质相关性分析:ILK与Fn、Col I、α-SMA均呈正相关,相关系数分别为0.897(P<0.05)、0.938(P<0.05)、0.890(P<0.05)。结论:(1)10 ng/mL TGF-b1刺激HK-2细胞24 h是TGF-b1诱导HK-2细胞转分化为肌成纤维细胞的较好条件。(2)阿魏酸下调模型组细胞ILK、Fn、Col I、α-SMA的mRNA及蛋白质表达水平,阻抑TGF-b1诱导的HK-2细胞向肌成纤维细胞转分化。(3)阿魏酸拮抗HK-2细胞向肌成纤维细胞转分化的作用可能与抑制TGF-β1的下游信号因子ILK有关。