【摘 要】
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基因载体对于基因治疗成败起着关键作用,腺病毒载体(Adv)由于具有易于制备获得高滴度病毒、可转导分裂期和非分裂期细胞等优点而成为一种常用病毒载体,但由于存在基因转导的C
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基因载体对于基因治疗成败起着关键作用,腺病毒载体(Adv)由于具有易于制备获得高滴度病毒、可转导分裂期和非分裂期细胞等优点而成为一种常用病毒载体,但由于存在基因转导的CAR依赖性、组织特异性低、可能引发免疫反应等缺点,影响了腺病毒载体在基因治疗研究中的应用。本研究针对上述不足,制备了一种新型纤毛突变型Adv(FM-Adv),在普通Adv纤毛头节区HI环上插入了具有整合素特异性的RGD肽,大大提高了对表达αv整合素的CAR(-)细胞的转导能力,其对CAR(-)或CAR弱表达细胞的转导效率约为普通Adv的10~1000倍。 由于用活化的聚乙二醇(PEG)修饰蛋白质和多肽,可提高其体内稳定性、延长半衰期、减小免疫原性及抗原性,并对肿瘤具有一定的被动靶向性。所以,在研究中还使用甲氧基聚乙二醇(mPEGs)对Adv进行PEG修饰,制备得到PEG-Adv,大大延长了Adv的血浆半衰期,并减弱其可能引起的免疫反应。但是,Adv在经PEG修饰后,病毒颗粒表面PEG链产生的立体位阻使其转染能力大大降低。所以,实验中进一步使用RGD-mPEG(未端连接了RGD肽的PEG)对Adv进行PEG修饰,制备得到RGD-PEG-Adv,其基因转导能力与RGD-PEG-Adv相同,同时具有抵抗抗体中和、巨噬细胞呑食和血浆半衰期长等优点。 趋化因子是一类在细胞的生理过程中发挥着重要作用的细胞因子样蛋白质,可趋化白细胞和免疫细胞向组织浸润。趋化因子在肿瘤生物学中具有较复杂的作用和重要意义,将趋化因子导入肿瘤组织,能
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