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OsHIP26是本实验室前期研究中利用酵母双杂交技术从日本晴水稻cDNA文库中得到的能与水稻黄单胞的harpinXoc (hpalXoc,也简写为hrf2或h2)互作的一个cDNA片段,序列全长528bp。经过序列blast后发现在水稻、玉米以及毛竹中都存在着OsHIP26的同源序列。为了进一步确证OsHIP26和]harpinXoc(?)目互作用,以及两个作用蛋白中的关键功能域,我们通过设计不同的缺失片段,将其克隆到相应的酵母双杂交载体上,构建成重组载体,转化酵母菌株后把重组载体转入对应的酵母菌中后利用酵母双杂交技术来检测不同片段间的的互作。结果显示,对于OsHIP26,246bp-266bp为互作的关键区域,缺少这部分的亚克隆都无法与harpinXoc发生互作。来自稻黄单胞菌的harpinXoo (hpalXoo,也简写为hrf1或h1)和]harpinXoc一样都可以和OsHIP26互作。对hrf1的五个缺失片段的研究发现,只有位于hrf1的277-420bp的缺失片段C能与OsHIP26互作。该片段中可能存在一个与OsHIP26互作的活性中心。使hrfl失去过敏反应的hrf1L51P突变体经酵母双杂交显示存在有自激活活性,这说明,51位氨基酸由L(亮氨酸)改变为P(脯氨酸),可能改变了蛋白的高级结构或构象,从而使突变体改变了原功能。这一点和实验室前人得到的结果一致。为研究OsHIP26的亚细胞定位,选取可以和hrfl互作的Y5片段(1-267bp),构建GFP融合植物表达重组体。通过农杆菌侵染法,感染洋葱的表皮细胞,在荧光显微镜下观察GFP的表达情况,结合细胞的质壁分离,结果显示在洋葱表皮的细胞壁和细胞核中荧光比较强烈,细胞质中也有荧光,但相对较弱。