目的:通过检测GPER、ER在子宫内膜癌患者组织中的表达,明确雌二醇(Estradiol,E2)、GPER与子宫内膜癌发生发展的相关性。并研究E2通过GPER非转录效应促进子宫内膜癌细胞增殖的机制。方法:一、GPER、ER在子宫内膜癌组织中的表达分析收集临床子宫内膜癌病例,并选取绝经后无激素相关疾病如(子宫脱垂,卵巢非激素相关肿瘤)的女性作为对照组。手术切除的子宫内膜癌组织经常规固定、包埋、切片后,采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织GPER、ER的表达情况,并测定血浆E2浓度,测定肿瘤组织SphK活性。以确定子宫内膜癌与GPER、SphK活性的相关性。二、GPER/SphK/ERK通路介导雌二醇促裸鼠子宫内膜癌增殖作用1.采用切除双侧卵巢的办法,建立裸鼠去势模型。然后将HEC-1A子宫内膜癌细胞接种于裸鼠背部皮下建立移植性肿瘤模型。2.实验分组及给药方案:(1)模型组:接种子宫内膜癌细胞后,每天腹腔注射生理盐水0.1mL,连续三周。(2)雌二醇组(E2组):接种前1 d将1.7mg 17β雌二醇缓释片接种在裸鼠后颈部皮下。(3)雌二醇+DMS组(E2+DMS组):接种前1 d将1.7mg 17β雌二醇缓释片接种在裸鼠后颈部皮下。接种肿瘤后,每天腹腔注射DMS 0.1mL/只,连续三周。(4)雌二醇+G15组(E2+G15组):接种前1 d将1.7mg 17β雌二醇缓释片接种在裸鼠后颈部皮下。接种肿瘤后,皮下注射G15 0.1mL/只,每周两次,连续三周。(5)雌二醇+PD98059组(E2+PD98059组):接种前1 d将1.7mg 17β雌二醇缓释片接种在裸鼠后颈部皮下。接种肿瘤后,每天腹腔注射PD98059 0.1mL,连续三周。3.实验过程中,每3天测量肿瘤大小,并计算肿瘤体积。接种肿瘤3w后,颈椎脱臼处死小鼠,剥除肿瘤组织,称重,部分组织置于液氮中保存。4.Western blot检测ERK1/2磷酸化以及CyclinD1、E1、MMP-9、SphK1及SphK2的表达情况5.检测肿瘤组织SphK活性变化。结果:一、GPER、ER在子宫内膜癌组织中的表达分析子宫内膜癌组患者血浆E2水平明显高于非子宫内膜癌对照组。ER表达与GPER表达无明显相关性。GPER阳性表达与FIGO分期、组织分化、肌层浸润有一定关联。GPER阳性患者SphK活性明显高于阴性表达照组二、GPER/SphK/ERK通路介导雌二醇促裸鼠子宫内膜癌增殖作用1.E2对子宫内膜癌移植瘤小鼠肿瘤生长的影响成功建立HEC-1A移植性肿瘤小鼠模型,给药过程中,与对照组比较,E2组肿瘤体积明显增大,GPER阻断剂G15、SphK抑制剂DMS以及ERK抑制剂PD98059可抑制E2诱导的肿瘤体积增大。给药21d后,摘除肿瘤组织并称重结果显示,E2可增加肿瘤组织重量,而上述作用可为G15、DMS以及PD98059所阻断。2.E2对子宫内膜癌移植瘤小鼠肿瘤组织SphK活性的影响E2可增加SphK活性,而G15以及DMS可抑制E2诱导的SphK活性增高,PD98059对SphK活性无影响。3.E2对子宫内膜癌移植瘤小鼠肿瘤组织SphK1、SphK2蛋白表达的影响E2以及G-15、DMS、PD98059对肿瘤组织SphK1、K2蛋白表达无影响。4.E2对子宫内膜癌移植瘤小鼠肿瘤组织ERK1/2磷酸化的影响各处理组对t-ERK1/2的蛋白表达无明显影响。但E2可以促进ERK1/2磷酸化。PD98059可抑制E2诱导的ERK1/2磷酸化。G-15以及DMS也可消除E2对p-ERK1/2的影响。5.E2对子宫内膜癌移植瘤小鼠肿瘤组织Cyclin D1、Cyclin E1、MMP-9的蛋白表达的影响与模型组比较,E2可增加Cyclin D1、Cyclin E1、MMP-9蛋白表达,各阻断剂可抑制E2上调上述蛋白的作用。结论:E2能够通过GPER途径促进子宫内膜癌发生发展。GPER/SphK/ERK通路参与了E2诱导的HEC-1A子宫内膜癌细胞增殖,该作用与诱导Cyclin D1、Cyclin E1、MMP-9蛋白表达有关。