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[目的]研究在人支气管上皮细胞(HBE)中5-LOX介导B(a)P产生氧化应激以及氧化损伤作用,为5-LOX介导化学物氧化所致DNA损伤以及癌变的机制提供初步依据,进一步证明RNA干扰是一种有效的抑制5-LOX代谢活化作用的技术。[方法]以不同浓度B(a)P(16μmol/L、32μmol/L、64μmol/L)染毒正常HBE细胞、经5-LOXshRNA处理的细胞以及载体对照细胞24小时,采用多功能荧光酶标仪测定细胞内活性氧(ROS)水平,分光光度计测量抗氧化酶类过氧化氢酶(CAT).超氧化物歧化酶(SOD)活力和非酶类抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)含量,酶标仪检测细胞内8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和丙二醛(MDA)。检测特异性5-LOX抑制剂AA861及其它主要代谢酶类抑制剂对上述氧化应激和损伤指标的影响。[结果]B(a)P可诱导HBE细胞内氧化应激指标ROS在B(a)P处理浓度为32.64μmol/L时显著增加(p<0.05),抗氧化酶SOD活力随着染毒浓度增加呈先升高后降低趋势(p<0.01),CAT活力在B(a)P处理浓度为64μmol/L(?)(?)寸显著增强(P<0.01),抗氧化剂GSH显著降低(P<0.01)；同时在B(a)P处理浓度为32、64μmol/L时还可引起脂质和DNA氧化损伤指标MDA和8-OHdG含量增加(p<0.05)、AA-861(?)(?)5-LOXshRNA处理可显著抑制B(a)P所致的氧化应激和氧化损伤水平,且5-LOXshRNA对氧化损伤的抑制作用更为显著。另外,CYP4501A和PGS特异性化学抑制剂a-萘黄酮与萘普生亦可在部分染毒剂量组对B(a)P引起的氧化应激和损伤表现出一定的抑制作用。[结论]AA-861(?)(?)5-LOXshRNA对B(a)P所致HBE细胞氧化应激及氧化损伤具有保护作用,可能与5-LOX介导的B(a)P代谢活化受到抑制有关,表明HBE细胞内B(a)P可能主要通过5-LOX代谢活化诱导产生氧化应激及DNA氧化损伤,后者与其致癌机制密切相关。而利用RNAi能更有效地抑制5-LOX介导B(a)P产生的DNA损伤作用。图12