弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性寄生于有核细胞内的寄生虫,无宿主特异性,可感染人和几乎所有温血动物。目前,弓形虫病在世界范围内广泛流行,因无特效疫苗和治疗药物,使人类和畜牧养殖业遭受巨大危害,已成为世界性的重要公共卫生问题。近年来,弓形虫疫苗研究已取得很大进展,但因弓形虫生命周期与致病机理复杂,至今仍未研制出理想的疫苗。因此,开发新的具有潜力的疫苗候选抗原分子,为研发切实有效的弓形虫疫苗奠定基础,已成为研制人兽共患弓形虫疫苗的重点。本课题基于前期的弓形虫与宿主细胞表面受体唾液酸结合的蛋白质组学分析,通过生物信息学预测分析,最终选取与唾液酸结合上调且功能完全未知的TGME49＿269450蛋白质,进行克隆、表达、纯化以及亚细胞定位,并对其功能进行了初步研究。旨在探索弓形虫通过唾液酸途径入侵宿主细胞的分子机理,进而为确定新的弓形虫疫苗候选抗原奠定基础并提供新的思路。本研究利用弓形虫Toxo DB数据库下载TGME49＿269450基因1053bp全长序列。通过生物信息学软件分析,预测出该蛋白有信号肽,无跨膜区,亲水性与抗原性良好。提取弓形虫RH株速殖子总RNA,通过反转录PCR扩增目的片段,经序列比对与TGME49＿269450序列一致。随后,构建重组原核表达载体(TGME49＿269450-p ET28a和TGME49＿269450-p GEX-4T-1),大量纯化带His和GST标签的TGME49＿269450重组蛋白质。使用His标签重组蛋白免疫大鼠和家兔,制备多克隆抗体血清,通过Western-blot验证该蛋白质在弓形虫全虫蛋白质中确实存在。通过蛋白质的亚细胞定位实验,初步推测其分布在虫体前端。纯化制备的兔源Ig G,进行体外的抗体抑制虫体入侵实验,结果发现可降低虫体入侵率,表明该蛋白的抗体对虫体入侵细胞存在一定的抑制作用。同时,使用GST标签重组蛋白质,证明了目的蛋白质可与唾液酸结合、与细胞黏附,推测该蛋白可能与宿主细胞表面唾液酸结合介导虫体入侵。本研究的目标蛋白质TGME49＿269450蛋白质可大量纯化,初步推测其分布在虫体前端,体外其可与唾液酸结合、与细胞黏附,该蛋白质的抗体可降低虫体对细胞的入侵率,结果表明该蛋白质可能参与了弓形虫依赖液酸途径入侵宿主细胞的过程。