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研究背景及目的：Fms样酪氨酸激酶3 (Fms-like tyrosine kinase-3, FLT3)属于III型受体酪氨酸激酶(Receptor Tyrosine Kinase,RTK)家族成员,在与其配体FL(FLT3 ligand,FL)结合后,使酪氨酸残基磷酸化,并通过各种胞浆蛋白传导激活信号,提供增殖刺激,促进白血病恶性克隆的增殖与维持。近年来,有许多研究发现FLT3基因出现内部串联重复(internal tandem duplication,ITD)突变,导致近膜结构域(juxtamembrane domain, JM)延长,也称FLT3长度突变(FLT3 length mutation,FLT3-LM),且发生FLT3-ITD的患者具有相对特异的临床特征。发生突变的FLT3受体在配体非依赖的情况下发生自动磷酸化和组成性激活,引起下游异常的信号传导,在造血系统恶性疾病的发生发展中具有重要作用。一些急性白血病(acute leukemia, AL)细胞共表达FLT3和FL,两者可能通过自分泌,旁分泌形式发生FLT3受体的活化,FLT3的高表达水平可能通过野生型FLT3正常信号传导的强化方式,在白血病发病中发挥重要作用。本试验旨在研究在骨髓涂片中提取微量DNA及研究FLT3-ITD在AL患者及各亚型中的发生率,及其与白血病发生、发展的关系,探索FLT3-ITD在AL治疗和预后判断中的应用价值。方法：在79份－20℃保存1-5年的未经瑞氏染色和化学固定的AL骨髓涂片中提取微量DNA,采用基因组DNA聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)技术检测48例初治急性非淋巴细胞白血病(acute nonlymphocytic leukemia, ANLL)(其中M11例,M218例,M313例,M40例,M515例,M61例,M70例),28例初治急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia, ALL),1例混合细胞白血病患者,1例由骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome, MDS)转变而来的M2患者,1例多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)化疗后继发的M2患者,对照组10例非恶性血液病人的FLT3-ITD发生率。用logistic回归分析相关的11个因素：年龄、性别、骨髓原始细胞比例、外周血白细胞数、外周血血红蛋白(hemoglobin,Hb)、外周血血小板(platelet, PLT)、肝脾肿大、中枢神经系统浸润、血清肌酐(creatinine,Cr)值、血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)值、FLT3突变情况与初次化疗达完全缓解(complete remission,CR)的关系,并对可能影响AL患者预后的15个因素(年龄、性别、白血病类型、外周血原始细胞比例、骨髓原始细胞比例、外周血白细胞数、外周血Hb、外周血PLT、肝脾肿大、淋巴结肿大、中枢神经系统浸润、血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、血清肌酐、血清ALT、FLT3突变情况)运用比例风险模型(Cox回归)进行生存分析。结果：采用PCR技术,79例AL患者中的48例初治ANLL患者共检测到5例FLT3-ITD阳性,突变率为10.42%(其中1例为ANLL-M2患者,1例为ANLL-M3患者,2例为ANLL-M5患者,1例为ANLL-M6患者),各型之间突变率无统计学差异(P<0.05)。28例初治ALL,1例混合细胞白血病患者,1例由MDS转变而来的M2患者,1例继发于多发性骨髓瘤(MM)化疗后的M2患者和10例非恶性血液病人中均未检测到FLT3-ITD。单因素分析显示FLT3-ITD组与非突变组在年龄、性别、白血病类型、外周血原始细胞比例、骨髓原始细胞比例、外周血白细胞数、外周血Hb、外周血PLT、血清LDH值、血清肌酐值、血清ALT值方面无统计学差异(P>0.05); FLT3-ITD组较非突变组初次诱导CR率低,总生存时间短,有统计学差异(P<0.05)。logistic回归分析显示年龄、性别、骨髓原始细胞比例、外周血白细胞数、外周血Hb、外周血PLT、肝脾肿大、中枢神经系统浸润、血清肌酐值、血清ALT值、FLT3突变情况与初次化疗达CR没有关系,Cox回归生存分析显示中枢神经系统浸润和FLT3-ITD的RR值分别为5.910和13.884,是影响AL患者生存时间的危险因素。结论：经对照研究,使用苯酚：氯仿：异戊醇法提取骨髓涂片微量DNA成功率较高,是进行回顾性分子生物学研究的重要实验方法；FLT3-ITD在ANLL患者中发生频率较高,且多见于M5及M3患者；本研究提示FLT3-ITD与CR率和总生存时间有关,FLT3-ITD阳性ANLL患者初次诱导CR率低,总生存时间短；FLT3突变情况、年龄、性别、骨髓原始细胞比例、外周血白细胞数、外周血Hb、外周血PLT、肝脾肿大、中枢神经系统浸润、血清肌酐值、血清ALT值与AL患者初次化疗达CR无明显关系。FLT3-ITD和中枢神经系统浸润是初治AL患者不良预后的危险因素。