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近年,在研究肿瘤发生机制的基因调控上,发现一种原癌基因c-met与肿瘤的发生发展密切相关,c-met与其配体SF/HGF(Scatter factor/Hepatocyte growth factor)构成的信号通路在肿瘤转移中起着关键作用.选择性地阻滞肿瘤细胞的信号通路,控制肿瘤的生长和转移是当前极具吸引力的研究热点.在该研究中,我们利用c-met反义核酸质粒及U1SnRNA/核酶/反义c-met复合体质粒转染肝癌SF7721细胞株,对c-met进行转录水平上的封闭并对比转染前后其生长的变化,以此探讨阻断HGF/SF-c-met信号转导在肝癌中的作用.一、反义c-met真核细胞表达质粒的构建.为深入研究c-met/HGF通路在肝癌生长和转移中的作用,我们选择SF+SMMC7721细胞(SF/HGF全长cDNA转染SMMC7721细胞).作c-met反义RNA转染靶细胞.二、反义c-met表达质粒与核酶/c-met反义核酸复合体质粒及空白质粒转染SF7721细胞.利用脂质体DOSPER包埋pTracer-CMV2-antisense-c-met真核细胞表达质粒U1SnRNA/核酶/Met复合体质粒和空白对照pTracer-CMV2表达质粒及复合体对照组质粒(6μIDOSPER/1.5μgDNA),进行体外转染入SF7721细胞内.三、c-met反义寡核苷酸链、反义c-met构建质粒及其核酶与c-met反义核酸复合体质粒对肝癌SF7721细胞的影响.用稳定转染c-met反义核酸质粒,核酶/反义复合体质粒的SF7721细胞进行体内外实验,比较转染前后细胞的生长和运动能力.四、小结c-met/HGF信号通路在胚胎的细胞分化和肿瘤的形成和生长过程中起着重要的作用,SF/HGF和c-met在多种肿瘤中呈高表达,关系着细胞的运动、离散、血管形成等.我们通过反义技术选择c-met为靶基因,构建出c-met真核表达质粒,并同时运用核酶/反义核酸复合体质粒来阻断该通路,成功地降低了c-met的表达及成瘤性.该研究为探讨反义c-met及核酶对肝癌细胞生物学行为的影响奠定了基础.