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[目的]肺癌是世界范围内一个严重的公共卫生问题,也是癌症相关死亡的主要的原因之一。虽然诊疗方法不断改进,但肺癌患者的5年生存率并未得到明显提高,给患者造成了极度的精神痛苦和沉重的经济负担。早期诊断及早期治疗被认为是提高肺癌患者生存率、改善预后的重要措施。因此,迫切需要深入探讨肺癌的发病机制,发掘新型诊疗标志物,为肺癌的有效诊治奠定基础。LncRNA是一类转录本长度大于200nt的调节性非编码RNA,能够在转录前、转录、转录后等多个水平调控基因表达,广泛参与细胞凋亡、增殖、分化等调控,具有重要的生物学功能。近年来研究发现,与癌旁组织相比,大量lncRNA在肺癌组织中呈现异常表达,这些lncRNA可通过影响肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为来调控肺癌的发生发展。因此,lncRNA为肺癌发病机制的阐明及新型诊断方法的研发提供了新途径。本研究旨在筛选在肺癌中异常表达的lncRNA,并从中挑选潜在的肺癌标志性lncRNA进行表达验证及初步功能研究。[方法]1.目的lncRNA筛选利用lncRNA+mRNA表达谱芯片（一共包含33240条lncRNA探针）对23对肺癌及配对的癌旁组织进行检测,以表达倍数FC（abs）≥2和P≤0.05为条件筛选差异表达的lncRNA,并根据表达一致性原则挑选可能在肺癌发生发展中发挥重要作用的候选lncRNA。应用CPAT和CPC数据库对lncRNA的蛋白编码能力进行预测,ORF Finedr数据库分析lncRNA的开放性阅读框,lncLocator对lncRNA的亚细胞定位进行预测,应用RegRNA2.0数据库对lncRNA潜在结合的miRNA进行预测,据预测结果用miRNA靶基因预测数据库miRBD、miRTarBase、TargetScan进行预测,绘制韦恩图,筛选三个数据库预测的相同的miRNA潜在调控的靶基因。2.Linc-PIK3C2G-2在肺癌中的表达验证为验证芯片结果可靠性,首先运用RT-qPCR方法检测32例肺癌组织及其配对癌旁组织中linc-PIK3C2G-2的表达情况。并进一步在NSCLC细胞系A549、宣威肺癌细胞系JT、正常支气管上皮细胞系Beas-2b中对linc-PIK3C2G-2的表达情况进行验证。最后,为了探讨linc-PIK3C2G-2能否成为肺癌潜在的循环分子诊断标志物,我们对54例肺癌患者、56例良性肺疾病患者和60例表观健康人群血清中的linc-PIK3C2G-2的含量进行检测和比较分析。3.Linc-PIK3C2G-2异常表达对肺癌细胞生物学特性的影响构建linc-PIK3C2G-2 sh-RNA 干扰载体（sh-linc-PIK3C2G-2）及相应的对照载体（sh-NC）,转染至A549细胞构建筛选稳定转染细胞系。通过CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验、流式细胞术等体外细胞实验,观察linc-PIK3C2G-2异常表达对肺癌细胞生物学特性的影响。[结果]1.根据lncRNA+mRNA表达谱芯片及生物信息分析结果,我们选择在肺癌组织显著高表达的linc-PIK3C2G-2为本次研究的目的基因。LncLocator预测linc-PIK3C2G-2主要定位于细胞质。RegRNA2.0预测has-miR-3679-5p可能为linc-PIK3C2G-2 结合的 miRNA。miRBD、miRTarBase、TargetScan 预测的has-miR-3679-5p相同的调控靶基因是EPHA2和MRAS。2.肺癌组织中linc-PIK3C2G-2的表达显著高于正常的癌旁组织（P=0.0043）。Linc-PIK3C2G-2在NSCLC细胞系A549中的表达显著高于正常人支气管上皮细胞系Beas-2b（P=0.0025）,而在宣威肺癌细胞系JT中的表达低于正常人支气管上皮细胞系Beas-2b中的表达（P=0.0082）,提示linc-PIK3C2G-2在肺癌细胞株中的表达有高有低,后续我们将选取linc-PIK3C2(G-2相对高表达的A549细胞系作为模型细胞进行体外细胞实验。而在肺癌组血清中linc-PIK3C2G-2的含量高于良性肺疾病组和表观健康人群组（P<0.001）,良性肺疾病组和表观健康人群组中linc-PIK3C2G-2的含量差异无统计学意义（P>0.05）。3.成功构建linc-PIK3C2G-2特异性干扰表达载体（sh-linc-PIK3C2G-2）及无意义序列对照表达载体（sh-NC）,以干扰效率较高的两组分别构建A549稳定转染细胞株。体外细胞实验显示,与sh-NC组细胞相比,sh-linc-PIK3C2G-2组细胞的增殖能力降低（P<0.05）、迁移能力显著降低（P<0.01）、侵袭能力显著降低（P<0.01）、细胞凋亡比例提高（P<0.01）。[结论]1.肺癌组织中linc-PIK3C2G-2的表达明显高于正常癌旁组织。肺癌组血清中linc-PIK3C2G-2的含量高于良性肺疾病组和表观健康人群组。2.Linc-PIK3C2G-2表达下调能抑制A549细胞的增殖、迁移及侵袭能力,促进细胞凋亡。因此,linc-PIK3C2G-2可能参与了肺癌的恶性进展,具有作为肺癌辅助诊断分子标志物的潜在价值。