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目的:1.采用大鼠心脏冠脉结扎术制备心衰模型,观察心脏的β3-AR对心肌结构的影响。2.检测SR 59230A对大鼠心脏MicroRNAs表达的影响,探讨β3-AR对心脏MicroRNAs表达的可能作用机制。方法:1.心衰动物模型的制备:将100只Sprague-Dawley(SD)大鼠(180-230g)随机分为伪手术组(40只)和手术组(60只),手术组结扎心脏冠脉左前降支制备心衰模型,伪手术组实验大鼠心脏只穿线不结扎。术前记录正常心电图,术中实时监测心电图变化,术后八周对实验大鼠心脏做超声心动检测,测定左心室收缩末期内径(LVIDS),左心室舒张末期内径(LVIDD),射血分数(EF)和左心室短轴缩短率(%FS),确定心衰手术成功的大鼠为心衰组。2.动物分组:将伪手术组大鼠随机分为两组,伪手术组(Sham control group,Sham组)和伪手术+SR 59230A组(Sham+SR group,Sham+SR组)。心衰组大鼠也随机分为两组:心衰组(CHF control group,CHF组)和心衰+SR 59230A组(CHF+SR group,CHF+SR组)。3.阻断β3-AR对大鼠心脏MicroRNAs表达的影响:Sham+SR组和CHF+SR组大鼠腹腔注射1ml SR 59230A(浓度85mmol/l),Sham组和CHF组大鼠腹腔注射等量生理盐水,每天两次,连续注射7周后提取各组大鼠心脏RNA,采用NanoDrop2000C检测RNA的浓度与质量,通过microarray方法检测β3-AR对大鼠心脏MicroRNAs表达的影响。4.心脏结构的改变和可能的信号转导途径:取各组大鼠左室心肌组织于10%的福尔马林溶液中固定,然后进行石蜡包埋,组织切片,通过H&E染色观察心脏结构和心肌细胞形态变化,免疫组织化学法检测心肌β3-ar、nf-κbp65和p53等相关蛋白的表达;同时取各组大鼠心脏冠脉结扎线下心肌组织做westernblot检测,定量分析各组心肌组织β3-ar、nf-κbp65、p53和p53-phospho-serine15等蛋白的表达,以确定β3-ar改变心脏结构和功能的信号转导途径。结果:1.超声心动检测结果:采用超高分辨率小动物超声实时影像系统测定sham组和chf组大鼠的lvidd、lvids及ef,并计算fs值,结果显示模型成功的心衰组(chf)大鼠的心功能较伪手术组(sham)明显下降。与sham组比较,chf组lvidd及lvids明显增大(p<0.05,p<0.05),lvef及%fs则明显降低(p<0.01,p<0.01),证明模型成功。2.sr59230a对大鼠心脏micrornas表达的影响:micrornamicroarray分析结果显示大鼠在体给予sr59230a后,sham组与chf组有18种micrornas共同表达下调,其中mir-125b-5p,mir-143-3p,mir-145-5p,mir-26a-5p,mir-30a-5p和mir-320-5p与nf-κb信号通路有关。3.h&e染色观察各组心肌组织病理学改变:在sham组,心肌组织完好,未见损伤,心肌细胞排列整齐,核染色清晰;而在chf组,心肌组织大面积皱缩,心肌纤维肿胀,断裂,间质水肿。此外,心肌细胞排列紊乱,松散,经sr59230a在体处理后,chf组大鼠心肌细胞排列紊乱减轻,心肌纤维断裂减轻,炎性细胞减少,炎症有逆转趋势。4.免疫组化结果:镜下可见chf组大鼠心脏β3-ar较sham组表达增加(p<0.01),nf-κbp65在胞核与胞质均有表达,在sham组均未见明显表达;chf组p53在胞核表达多于胞质。免疫组化评分结果显示,chf组nf-κbp65,p53表达较sham组增加(p<0.01,p<0.01);在体给予sr59230a后,chf组nf-κbp65,p53表达下降(p<0.05,p<0.05),而sham组nf-κbp65,p53表达增加(p<0.01,p<0.01)。5.westernblot结果:chf组β3-ar,nf-κbp65,p53-phospho-serine15蛋白表达明显高于sham组(p<0.05,p<0.05,p<0.05),chf组p53蛋白表达也高于sham组,但没有显著性差异。在体给予sr59230a后,chf组大鼠心脏nf-κbp65和p53-Phospho-Serine 15蛋白表达下降(P<0.05,P<0.01),但仍高于Sham组(P<0.05,P<0.05),而CHF+SR组与CHF组相比,p53蛋白表达没有显著性差异。Sham组大鼠在体给予SR 59230A后,NF-κB p65,p53和p53-Phospho-Serine 15蛋白表达均显著增加(P<0.05,P<0.05,P<0.05)。结论:1.在体阻断β3-AR后,可缓解心衰大鼠心脏异常的形态结构和炎症倾向,提示β3-AR表达增加与心脏的损伤有关。2.给予SR 59230A可引起大鼠心脏MicroRNAs表达发生变化,其中miR-125b-5p,miR-143-3p,miR-145a-5p,miR-26a-5p,miR-30a-5p和miR-320-5p与NF-κB信号途径有关。3.心衰大鼠心脏β3-AR,NF-κB p65和p53-Phospho-Serine 15表达增加,用SR 59230A阻断β3-AR可以降低心衰大鼠心脏NF-κB p65和p53-Phospho-Serine 15的表达,证明β3-AR在心脏的作用与p53磷酸化及NF-κB的表达有关。