【摘 要】
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[目的]已有研究报道人心脏c-Kit+细胞的外泌体有血管生成或细胞保护作用,我们前期研究发现缓激肽（Bradykinin,BK）可以促进人心脏c-Kit+细胞的增殖和迁移,但是缓激肽是否对人心脏c-Kit+细胞的外泌体有调控作用未见报道。本课题旨在研究缓激肽诱导的人心脏c-Kit+细胞外泌体对血管生成作用的影响。[方法]收集缓激肽处理和未处理的人心脏c-Kit+细胞培养基,检测其对人脐静脉内皮细胞
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[目的]已有研究报道人心脏c-Kit+细胞的外泌体有血管生成或细胞保护作用,我们前期研究发现缓激肽（Bradykinin,BK）可以促进人心脏c-Kit+细胞的增殖和迁移,但是缓激肽是否对人心脏c-Kit+细胞的外泌体有调控作用未见报道。本课题旨在研究缓激肽诱导的人心脏c-Kit+细胞外泌体对血管生成作用的影响。[方法]收集缓激肽处理和未处理的人心脏c-Kit+细胞培养基,检测其对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的血管生成的作用;为了明确是否是培养基中的外泌体发挥此作用,分离这些培养基中的外泌体,将这些外泌体分别作用于HUVECs和注射到后肢缺血模型小鼠后肢中,拍照和激光多普勒灌注成像记录这些外泌体对血管生成的作用,免疫荧光检测血管新生相关标志物;为研究外泌体何种物质发挥作用,我们检测了外泌体中的血管生成相关蛋白表达,并对外泌体中microRNA（miRNA）进行测序,筛选可能调控的miRNA,并进一步验证了敲除miRNA后对血管新生的作用。[结果]缓激肽预处理的培养基和外泌体相对于对照组都有明显的促血管生成作用,此作用也在后肢缺血小鼠中进一步验证。蛋白芯片结果显示,与对照组相比,缓激肽预处理c-Kit+细胞外泌体相对于未处理的外泌体中的血管新生相关蛋白表达无明显差异,推测缓激肽预处理c-Kit+细胞外泌体通过其包裹的miRNA发挥作用。MicroRNA-Seq结果显示,缓激肽预处理的c-Kit+细胞外泌体中miR-3059-5p表达升高最为显著。利用基因干预方法敲减c-Kit+细胞中的miR-3059-5p后,缓激肽预处理的c-Kit+细胞外泌体的增强血管生成作用消失,提示缓激肽通过调控c-Kit+细胞外泌体中的miR-3059-5p增强c-Kit+细胞外泌体的促血管生成作用,此结果也在后肢缺血动物中进一步证实。[结论]缓激肽通过调控c-Kit+细胞外泌体中miR-3059-5p的高表达发挥促进血管生成作用。
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