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目的:目前国内对高毒力碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌（Hyper virulent carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae,hv-CRKP）的分子流行病学和耐药机制报道较少。根据课题组现有研究基础我们对重庆市hv-CRKP分子流行病学及主要耐药机制进行初步探索,旨在为本地区治疗hv-CRKP感染提供理论依据。同时评价mCIM联合eCIM对碳青霉烯酶的筛选能力,为其临床应用提供依据。方法:1、收集2015年9月-2017年9月重庆市20家区县医院分离的碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌（Carbapenem resistant klebsiella pneumoniae,CR-KPN）218株。采用微量肉汤稀释法复核对碳青霉烯类抗生素的耐药性;拉丝实验（String test,ST）筛选高毒力菌株;采用脉冲场凝胶电泳（Pulsed field gel electrophoresis,PFGE）和多位点序列分型（Multiple locus sequence typing,MLST）对hv-CRKP进行同源性分析;利用PCR技术和微量肉汤稀释法对常见耐药机制如产酶基因、膜孔蛋白缺失及外排泵机制等进行检测,同时进行荚膜分型、毒力基因检测及血清杀伤试验以探讨其毒力情况。2、收集2015年1月-2016年12月重庆市16家区县医院分离的耐碳青霉烯肠杆菌科细菌（Carbapenem resistant enterobacteriaceae,CRE）85株,碳青霉烯敏感肠杆菌科细菌（Carbapenem susceptible enterobacteriaceae,CSE）51株。采用PCR技术获得85株CRE和51株CSE携带碳青霉烯酶基因情况,用改良碳青霉烯灭活试验（Modified carbapenem inactivation method,mCIM）联合EDTA碳青霉烯灭活试验（EDTA carbapenem inactivation method,eCIM）对碳青霉烯酶表型和分类进行判断。以PCR检测结果为金标准,对mCIM联合eCIM检测碳青霉烯酶表型和分类的性能进行应用评价。结果:1、218株碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素呈现高水平耐药,耐药率分别为厄他培南100%、亚胺培南96.8%、美罗培南95.9%,MIC50分别为厄他培南256?g/mL,亚胺培南128?g/mL,美罗培南64?g/mL。2、拉丝实验筛选出hv-CRKP6株,占比2.8%,以ST11（3/6）和ST592（2/6）两种型别为主,PFGE分型显示2株hv-CRKP同源。碳青霉烯耐药机制以产碳青霉烯酶和超广谱β内酰胺酶（extended spectrum beta-lactamases,ESBLs）为主（6/6）,未发现ompk35/ompk36膜孔蛋白缺失及外排泵过表达。对6株hv-CRKP进行荚膜分型发现K57血清型2株,未发现K1、K2、K5、K20及K54血清型。6株hv-CRKP毒力基因分布如下:铁载体（肠杆菌素entB、耶尔森菌素Irp-1/Irp-2）及粘附因子（Ⅰ型菌毛粘附基因fimH-1、Ⅲ型菌毛粘附基因mrkD、kpn、编码外膜蛋白脂多糖ycfM）均阳性（6/6）;与高粘性相关的基因（magA、rmpA）及重要铁载体气杆菌素Acrobactin等均有不同比例携带。血清杀伤试验结果显示4株hv-CRKP存在血清抗性。3、85株碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌中79株检出碳青霉烯酶基因,共表达A类和B类碳青霉烯酶基因8株,占比10.13%（8/79）,碳青霉烯酶表型筛选试验mCIM阳性78株,eCIM阳性44株。51株碳青霉烯敏感菌株未检测到碳青霉烯耐药基因且mCIM均为阴性。mCIM筛选肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的灵敏度为98.7%（95%CI,92.299.9）,特异性为100%（95%CI,92.1100）,Kappa值为0.985;eCIM筛选金属酶灵敏度为85.7%（95%CI,72.193.6）,特异性为94.4%（95%CI,80.099.0）,Kappa值为0.787;eCIM筛选丝氨酸酶灵敏度为89.5%（95%CI,74.396.6）,特异性为100%（95%CI,90.6100）,Kappa值为0.904。结论:1、重庆市CR-KPN对碳青霉烯类抗生素呈现高水平耐药,碳青霉烯类抗生素MIC50较其他地区高。2、重庆市CR-KPN中存在hv-CRKP流行,以ST11型别流行为主,未发现跨区县的聚集或暴发流行菌株;未发现除产酶外的其他耐药机制;毒力基因以携带铁载体相关基因和粘附因子相关基因为主,且大部分菌株有血清抗性。3、mCIM联合eCIM检测可有效筛选产碳青霉烯酶菌株,但随着共表达A类和B类碳青霉烯酶菌株的分离率增加会降低对金属酶筛选的灵敏度。