论文部分内容阅读
姜瘟病是一种由青枯劳尔氏菌引起的生姜毁灭性病害。长期以来，国内外对姜瘟病的防治多从农业防治和化学防治出发，防治效果不明显，而且造成了一定程度的环境污染。应用拮抗微生物对植物病害进行生物防治是比较理想的方法之一。因此，本研究拟从姜田土壤中分离一株拮抗细菌，并对其进行初步研究。本实验从巴中市青木镇堆放腐烂姜并且又长出健康姜苗的根际土中分离出106株细菌，在涂布有姜瘟病原菌青枯劳尔氏菌的肉汤培养基上进行初筛，得到6株对青枯劳尔氏菌有较强拮抗作用的细菌，通过摇瓶发酵后利用发酵液，采用改良的琼脂孔扩散实验复筛，获得一株具有强拮抗作用的菌株，命名为Q6号。通过与氯霉素（10mg／ml），农用链霉素（2mg／ml），防治姜瘟的农药降福500倍液，菌杀得800倍液做抑菌效果比较，可以知道该菌对青枯劳尔氏菌具有强拮抗作用。通过对该菌进行形态特征和培养特征观察，生理生化特征的鉴定以及16S rDNA的序列分析，可以看出该菌能利用蔗糖，葡萄糖，D-半乳糖，D（+）木糖，D-果糖，酒石酸盐，柠檬酸盐，丙二酸盐等，不能利用D-阿拉伯糖，L-精氨酸等，接触酶，硫化氢实验，V-P实验，硝酸盐还原阳性，吲哚实验，M．R实验，淀粉水解，纤维素分解阴性。将Q6号菌株的16S rDNA序列与GenBank中的序列进行比较，与其同源性最高的11个模式菌株均属于泛菌属。选取这11株模式菌，并以Pseudomonas syxygii为外群进行系统发育分析，其中与11个泛菌属的菌株的16S rDNA序列的同源性为95.54％～99％。在拮抗菌Q6发酵条件的优化中，系统研究了起始pH值、培养温度和时间、接种量、培养基装量、以及碳氮源等因素对泛菌Q6发酵产物抑菌活性的影响。结果表明，在起始pH值7.0～8.0，接种量为5％以上，培养基装量为广口三角瓶体积的20％以下，培养温度30—32℃，振荡培养48h时Q6发酵产物的抑菌活性最强。碳氮源分别以可溶性淀粉，CaCO3和酵母粉最好；在此基础上通过均匀设计法优化了发酵培养基配方。优化后的培养基配方为：可溶性淀粉1.25％，CaCO3 0.05％，酵母粉0.6％，NaCl 0.7％，KH2PO4 0.3％。对其拮抗物质进行了温度、酸碱度和酶三个方面的稳定性试验，当温度达到55℃以上时，随着温度和时间的变大，抑菌圈逐渐变小，但直到100℃，30min时，对病原菌的生长仍有抑制作用；pH3.0～9.5以上静置过夜后，拮抗物质对病原指示菌产生的抑菌圈几乎没有发生变化；经过蛋白酶K处理后，拮抗物质对病原指示菌产生的抑菌圈不变。结果表明，拮抗菌Q6的拮抗物质对热、酸碱和酶都有较强的稳定性。