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背景:近年来,过敏性疾病的发病率不断上升。过敏性疾病又分为过敏性哮喘、过敏性皮炎、鼻炎等。而过敏性哮喘多是由室内吸入性过敏原引起的,最常见的室内吸入性过敏原为尘螨,尤其粉尘螨及屋尘螨最常见。目前,已经陆续用分子生物学手段从尘螨里面克隆表达出了多种变应原蛋白,其中粉尘螨酸性核糖体P2蛋白(ALT)是新发现的尘螨过敏原。在本研究中,我们利用大肠杆菌原核表达系统克隆表达出粉尘螨酸性核糖体P2蛋白,并通过亲和层析得到了较高纯度的重组ALT蛋白,并鉴定其免疫原性,后又通过动物实验建立小鼠模型来证实了重组酸性核糖体P2蛋白是一种新型过敏原,并通过细胞实验探讨了ALT的致敏机理。目的:克隆表达粉尘螨ALT蛋白,并鉴定其免疫原性以及致敏机理。方法:(1)通过基因工程技术合成粉尘螨过敏原ALT基因,并与pET-32a载体连接后转入大肠埃希菌E.coli BL21诱导表达,通过亲和层析纯化得到重组蛋白;(2)间接酶联免疫吸附实验(ELISA)、临床的皮肤点刺测试(SPT)检测重组蛋白ALT的免疫原性;(3)动物模型证实重组ALT蛋白的致敏性;(4)细胞及动物实验探讨ALT蛋白的致敏机理。结果:(1)SDS-PAGE结果显示重组ALT蛋白分子量约27kDa;(2)临床皮肤点刺实验表明:20尘螨过敏患者中有3例对重组ALT过敏,阳性率15%;ELISA结果显示重组蛋白ALT能与尘螨过敏患者血清IgE抗体特异性结合,阳性率为20%,为尘螨次要过敏原,此过敏原正在申请命名中;(3)动物实验结果显示重组ALT蛋白能使小鼠产生过敏性哮喘症状,使机体Th1/Th2失衡,IL-4、IL-13等Th2型细胞因子升高,导致过敏;(4)体外细胞实验ALT能够激活PI3K/Akt通路诱导IL-13表达的升高,从而上调JAK-1的表达并导致STAT-6的磷酸化,其诱导Th2调节因子GATA-3和Th2特征性细胞因子的表达,造成Th1/Th2的失衡,从而导致过敏。结论:克隆,表达,纯化了具有过敏原性的粉尘螨重组蛋白ALT,并结合体内体外实验证实了重组ALT的致敏性,表明ALT是一种新的尘螨次要过敏原。