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目的:建立人子宫内膜腺癌细胞系EAC,检测其生物学特性和可能肿瘤标志物,为子宫内膜癌的基础和临床研究提供了良好的材料。并利用噬菌体随机十二肽库筛选出能够和子宫内膜腺癌细胞系EAC的特异性结合的短肽序列,分析序列组成,找出能够和子宫内膜腺癌细胞特异性结合的配体蛋白质及分析这些蛋白与细胞结合的氨基酸决定簇位点及方式,为研究短肽在肿瘤靶向药物开发和肿瘤特异性定位标志方面提供研究资料。 方法:将人子宫内膜腺癌组织块接种于裸鼠背部皮下,待裸鼠成瘤后将移植瘤做原代培养,稳定传代后,对其细胞形态,超微结构,生长曲线,致瘤率,染色体,及雌孕激素受体进行观察检测,并用RT-PCR技术在mRNA水平检测了PTEN基因的转录水平和PCR产物测序,及用免疫组化和Western blot方法在蛋白质表达水平检测了VEGF的表达水平。并用噬菌体随机十二肽库对体外培养的人子宫内膜癌细胞EAC进行5轮全细胞筛选。在五轮细胞筛选后的两部分噬菌体库中,即细胞表面结合部分和内化入细胞部分,分别随机挑选18个以上噬菌体单克隆进行测序。同时对随机挑选的噬菌体单克隆进行与野生型VcsM13噬菌体的竞争结合实验及对HepG-2、MCF-7、JEC、SWO38、NCI-H460,HLO2六种人类不同组织来源细胞系的特异性结合分析,在测序结果中找出及分析出现频率高的短肽序列和其可能的蛋白质结构。 结果:EAC细胞系目前已传代61代,同时液氮保种,复苏良好。该细胞系生长快,稳定传代,形态学特征符合腺上皮恶性肿瘤细胞特征。染色体检查为超二倍体。雌孕激素受体检查阴性。致瘤率100%,移植瘤病理学特征与原细胞系相似。EAC细胞中的PTEN mRNA水平高于正常,测序结果显示转录水平未见突变。VEGF蛋白表达水平高。经过噬菌体5轮全细胞筛选后,各部分噬菌体库的回收量均可达到10~5～10~6数量级,且竞争结合分析及细胞特异性结合分析均显示筛选后的噬菌体克隆及噬菌体库对子宫内膜癌细胞具有明显的特异性结合。测序结果显示有一条序列出现频率较高,序列-SNPTTPDHLWRG-在表面结合和内化释放