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目 的 克隆人组织纤溶酶原激活物（t-PA）基因并构建携带t-PA基因的真核表达重组质粒载体pcDNA3.1（+）/t-PA。方 法 采用高效Trizol试剂快速从引产胎儿心脏组织中提取总RNA，RT-PCR获得t-PA全长cDNA，扩增、纯化、回收t-PA基因片段，并将真核表达质粒pcDNA3.1（+）和t-PA基因片段分别双酶切，前者纯化回收大片段，后者纯化回收1.9kb片段，再将回收的pcDNA3.1（+）大片段与t-PA基因片段重组。对重组pcDNA3.1（+）/t-PA质粒进行酶切和PCR鉴定，并测序。结 果 成功地从引产胎儿心脏组织中克隆了t-PA基因，并构建了以pcDNA3.1（+）为载体的真核表达质粒载体。重组的pcDNA3.1（+）/t-PA经酶切（HindIII/BamHI）和PCR鉴定证实t-PA基因已成功地克隆到pcDNA3.1(+)中，测序结果显示克隆的全长t-PA基因片段与<WP=9>基因文库报告一致，证明为人全长t-PA cDNA。结 论 含t-PA基因新型真核表达质粒构建成功，为基因防治血管重建术中局部血栓形成的研究奠定了基础。关键词 基因克隆;组织纤溶酶原激活物;真核表达质粒