论文部分内容阅读
研究目的:卵巢癌的发生伴随着各种基因通路的相互作用,研究这些基因的功能有助于癌症的基因靶向治疗。EGF、FOXM1基因均提示可能参与卵巢癌的发生与恶性进展,本课题通过临床标本及体外实验研究EGF/FOXM1在卵巢癌细胞增殖、转移中的作用及作用机制。方法:采用免疫组化SP法对临床上收集的卵巢癌组织标本和正常的卵巢组织标本检测FOXM1的表达情况;利用Western blot技术分析人卵巢癌细胞HO8910PM、OVCAR3、SKOV3等细胞中FOXM1的表达情况;不同浓度EGF作用于SKOV3细胞后用Western blot法检测FOXM1的表达情况;cck8法检测不同浓度EGF对SKOV3细胞的增值影响;Transwell小室法检测不同浓度EGF对SKOV3细胞的迁移、侵袭影响;设计合成三种靶向人FOXM1基因的si RNA表达序列,应用脂质体LipofectamineTM2000共转染至SKOV3细胞作用24h后提取总蛋白,应用Western blot技术分析转染后SKOV3细胞FOXM1蛋白表达量,选取敲除FOXM1效能最佳的si RNA序列;cck8法检测敲除FOXM1后添加EGF与否对SKOV3细胞增殖的影响。结果:1、卵巢癌组织中FOXM1表达显著高于正常卵巢组织,FOXM1在卵巢癌OVCAR3细胞、SKOV3细胞、HO8910细胞中均有明显表达,其中SKOV3细胞表达量高于其他两种细胞;2、SKOV3细胞经不同浓度【浓度(ng/ml)=0、5、10、25、50、100】EGF处理后行Western blot法检测提示EGF浓度为10ng/ml时FOXM1的表达量最高(P<0.05);3、SKOV3细胞经不同浓度【浓度(ng/ml)=0、5、10、25、50、100】EGF处理后行cck8检测提示10ng/ml浓度的细胞吸光度最高(P<0.01);浓度为10ng/ml的EGF作用于SKOV3细胞作为实验组,不加EGF作为对照,Transwell小室迁移实验24h后电镜拍照提示实验组细胞迁移率大于对照组(P=0.002),侵袭实验24h后电镜拍照提示实验组细胞迁移率大于对照组(P=0.015);4、三种靶向FOXM1的si RNA感染SKOV3细胞后Western blot证实si RNA-FOXM1-801的沉默效果最好;cck8法检测si RNA-FOXM1-801沉默FOXM1后能显著抑制SKOV3细胞增殖(P=0.005);cck8法检测FOXM1–si RNA-801沉默FOXM1后吸光度提示对照组(未加EGF)和实验组(EGF=10ng/ml)统计结果无明显差异(P=0.882)。结论:FOXM1基因在卵巢癌组织中过表达,三株卵巢癌细胞株中均有FOXM1的过度表达,以SKOV3细胞的表达量最高;EGF浓度为10ng/ml时促进SKOV3细胞中FOXM1的表达作用最明显以及增强SKOV3细胞的增殖、侵袭能力,敲除FOXM1基因后EGF失去对细胞增殖的影响,从而证明EGF可能通过EGF/FOXM1通路对卵巢癌细胞的增殖、转移等有间接调控作用。