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目的:母乳是婴儿成长最天然、最安全的食物,它含有婴儿成长所需的所有营养物质和抗体,既能满足婴儿对营养的需求,又能保障婴儿免疫系统的发育。母乳作为益生菌的一个安全载体,可为婴儿提供定植并抑制肠道内致病菌感染的乳杆菌。而母乳中的乳杆菌的种类、发生率以及变化规律等是否与其哺乳期有着相关性的研究却鲜有报道。试验以期研究母乳中乳杆菌的种群发生规律且通过评估其益生特性从而分离筛选可抑制婴儿肠道感染的潜在益生菌,并用于医疗和保健行业中。方法:采用改良的培养法用MRS培养基进行菌株的分离筛选。利用指纹图谱(Rep-PCR Repetitive genomic fingerprinting)去重与16S r RNA同源性分析鉴定相结合的方法进行菌株鉴定,并通过MEGA V5.0建树对新疆喀什地区维吾尔族群体不同哺乳期母乳中乳杆菌种群的发生规律进行研究。经基因分型去重后挑取不同基因型的代表菌株通过体外模拟方法进行生长曲线、产酸性、抑菌活性、抗生素耐药性、溶菌酶耐受性、模拟胃肠液、耐酸耐胆盐等益生特性的评估。结果:以新疆喀什地区45份维吾尔族母乳为样品,大致分为初乳A期(产后1-5d)、成熟乳B期(15-150d)、晚成熟乳C期(151-300d)、晚乳D期(301-450d)和晚乳E期(451-570d)五个阶段。结果如下:(1)分离得到242株疑似乳杆菌菌株,经16S r RNA同源性分析鉴定分别隶属于乳杆菌属(Lactobacillus),肠球菌属(Enterococcus)和链球菌属(Streptococcus)三个属。其中Lactobacillus有220株,隶属于五个种,经Rep-PCR去重后被划分为12个基因型,分别为发酵乳杆菌(L.fermentum,82株,发生率:61.3%,平均相对丰度:45.4%,基因型:3种)、短乳杆菌(L.brevis,75,41.9%,38.1%,4)、口乳杆菌(L.oris,37,32.3%,15.1%,3)、革氏乳杆菌(L.gasseri,22,15.4%,9.24%,1)和较罕见的阴道乳杆菌(L.vaginals,4,9.7%,1.4%,1)。(2)L.fermentum的相对丰度在整个产后的初乳A期~晚乳E期呈现下降趋势,且从初乳中共分离得到L.fermentum一种乳杆菌;与此相反,L.brevis在成熟乳B期~晚乳E期呈现逐渐增加的趋势。L.oris在B,C和D期均分离得到且各阶段分离的该菌种数量无明显差异。而L.gasseri在B期~C期呈现非常明显的递增趋势,在C期母乳中却未分离得到该菌种,E期晚乳又分离出该菌种,但相比C期其数量大大减少。L.vaginals只在B期和C期中分离得到。五个阶段母乳的共有菌种是L.fermentum,但无特有菌种。总体来讲,从初乳到成熟乳乳杆菌的数量和种类呈上升趋势,从成熟乳到晚熟呈下降趋势,成熟乳B期乳杆菌种群结构达到最复杂水平。不同哺乳期母乳中乳杆菌种群变化趋势明显。(3)从所有分离株中,每种基因型随机选择三个分离菌株为代表菌株(共36株分离株)以评估其抗菌活性。分离菌株中,20株菌株对大多数指示病原菌表现出广谱抑菌作用(平均抑菌圈直径>10 mm),并选用于后续益生菌特性评价。19株菌株对万古霉素和复方新诺明耐药,KM66(L.brevis)耐药达5/8种。结合生长曲线、产酸、抑菌、溶菌酶、模拟胃肠液以及酸和胆盐的耐受性最终选择L.brevis KM147和L.fermentum Y3两株乳杆菌菌株作为潜在的益生菌。结论:乳杆菌在整个哺乳期中种群多样性丰富,变化趋势明显。体外益生特性试验结果表明,从母乳中分离出的具有抑制病原菌感染潜力的菌株中有两株可作为潜在益生菌。