【摘 要】
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目的:探讨蒜氨酸对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用,以及研究这种保护机制所涉及的相关蛋白和信号通路。方法:80mg/Lox-LDL诱导HUVEC 24h建立HUEVC损伤模型,使用总胆固醇（TC）和游离胆固醇（Fch）试剂盒检测细胞内TC和Fch含量;采用CCK8试剂盒检测不同浓度和不同时间蒜氨酸对HUVEC增殖活力的影响;使用Western bl
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目的:探讨蒜氨酸对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用,以及研究这种保护机制所涉及的相关蛋白和信号通路。方法:80mg/Lox-LDL诱导HUVEC 24h建立HUEVC损伤模型,使用总胆固醇（TC）和游离胆固醇（Fch）试剂盒检测细胞内TC和Fch含量;采用CCK8试剂盒检测不同浓度和不同时间蒜氨酸对HUVEC增殖活力的影响;使用Western blotting检测蒜氨酸对HUEVC损伤模型胱硫醚γ裂解酶（CSE）表达的影响,采用亚甲基蓝法检测HUVEC上清液中HS-含量。采用定量蛋白组学的方法对空白对照组（Con）、HUVEC损伤模型组（Mod）和蒜氨酸组（Alliin）细胞样本中的差异蛋白进行定量分析;在定量到的蛋白质中,以1.5倍为差异表达变化阈值,以统计学t检验P＜0.05为显著性阈值,对Alliin/Con、Alliin/Mod和Mod/Con中的差异蛋白进行统计分析;使用GO富集、KEGG通路富集和KEGG通路富集聚类对Alliin/Mod中的差异蛋白进行功能富集分析,并对差异蛋白显著富集KEGG通路进行Western blotting验证。结果:80mg/L的ox-LDL诱导HUVEC 24h细胞内出现大量红染颗粒,同时Fch含量超过TC含量50%,HUVEC损伤模型建立成功;12.5～50mg/L蒜氨酸作用HUVEC损伤模型24h能明显促进HUVEC增殖（P＜0.05）;蒜氨酸可显著上调HUVEC损伤模型CSE蛋白的表达（P＜0.05）,同时50mg/L蒜氨酸可显著增加HUVEC损伤模型细胞上清HS-含量（P＜0.05）;定量蛋白组学结果显示,共鉴定到6173个蛋白,其中5162个可定量;差异蛋白统计结果显示Alliin/Con共有108个蛋白出现上调,116个蛋白出现下调（P＜0.05）;Alliin/Mod共有33个蛋白出现上调,17个蛋白出现下调（P＜0.05）;Mod/Con共有106个蛋白出现上调,147个蛋白出现下调（P＜0.05）;Alliin/Mod差异蛋白功能富集和western blotting验证结果显示,蒜氨酸可以通过上调LDLR（P＜0.05）、ApoC（P＜0.05）和下调ApoB（P＜0.05）的表达调节ox-LDL诱导HUVEC损伤模型胆固醇代谢通路。结论:蒜氨酸可以通过调节CSE/H2S体系和胆固醇代谢通路发挥对ox-LDL诱导HUVEC损伤模型的保护作用。
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