本文对NOR1基因促进CB1954对肝癌HepG2细胞的杀伤机制进行了研究。本研究分为三个部分：　　㈠NOR1基因扩增与稳定细胞系的建立。通过分子克隆的方法从EST克隆中获得含有1266bp的开放阅读框NOR1基因完整片段，编码421个氨基酸蛋白质。利用双酶切(NheI以及XhoI)将NOR1目标基因接入载体pcDNA3.1+中，同时用XhoⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定确定得到绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2/NOR1正确构建的质粒。在HepG2细胞中瞬时转染pEGFP-C2/NOR1质粒，转染24小时之后荧光检测发现质粒转染效率达80％以上，NOR1的细胞定位于细胞质与细胞膜中，并且主要分布于细胞膜，免疫印迹检测(Western Blot)验证NOR1表达明显提高。为了进一步深入研究NOR1在细胞中的功能，通过G418筛选本研究建立了NOR1稳定转染的HepG2细胞系，其细胞整体形态和细胞大小，没有明显的差异，因此说明NOR1单独过表达没有明显改变HepG2的细胞形态。通过对活细胞的MTT测定实验发现细胞的增殖没有太明显的改变，利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平的改变，发现NOR1过表达后HepG2细胞没有出现细胞凋亡现象，证明对细胞没有明显的杀伤作用。　　㈡NOR1促进CB1954细胞杀伤机制研究。NOR1是一个与亚硝胺类化合物致鼻咽癌、肝癌相关的新基因，以前的研究结果表明在鼻咽癌细胞系CNE1中NOR1转染能增强2-硝基苯氮丙啶类化合物CB1954的细胞毒性，使肿瘤细胞死亡率增加。NOR1基因转染能使肝癌细胞HepG2中生长因子受体结合蛋白2(Grb2)在mRNA水平的表达增加约4.8倍，Grb2蛋白水平上调大约在8.7倍左右，有显著的变化。为了研究CB1954与NOR1是否能够诱导肿瘤细胞的凋亡，我们利用Annexin V-FITC/PI双染法的流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果证实HepG2过转NOR1基因能够加速CB1954对细胞凋亡现象，细胞出现了明显杀伤作用。随后本研究发现NOR1过表达之后CB1954诱导的Caspase-9的表达明显提高，说明NOR1的确促进了 CB1954诱导的细胞凋亡的发生。本研究发现NOR1也能增强CB1954在肝癌细胞系HepG2的细胞杀死率，加入酪氨酸激酶抑制剂genistein以及转染Grb2寡核苷酸抑制剂都能抑制CB1954引起的细胞毒性。Western-blot试验表明转染Grb2抑制剂能抑制其蛋白表达，并能抑制Grb2下游分子MAPK的活性。结果提示NOR1可能通过上调Grb2表达参与MAPK信号通路增强CB1954的细胞毒性，使肝癌细胞系HepG2的细胞死亡率增加。　　㈢NOR1基因在HepG2细胞中呈现高甲基化水平。NOR1基因在正常组织中广泛表达，但在鼻咽癌、肝癌等癌组织中表达显著下调，被认为是一个新的抑癌基因，与鼻咽癌、肝癌及血液系统肿瘤的发生发展密切相关。引起NOR1基因表达下调的原因尚未完全明了，目前认为NOR1基因启动子区高甲基化是导致其下调的主要原因。启动子CpG岛的DNA甲基化是常见的导致基因沉默的表观遗传学机制之一，我们通过亚硫酸氢盐修饰直接测序法(BSP)检测了NOR1基因在HepG2细胞中的甲基化水平，发现了甲基化率高达94.4％。在以后的研究中，我们也将检测NOR1基因在不同肝癌分期的患者的甲基化水平，并分析甲基化与化疗药物耐药性、病人预后的相关性，寻找肝癌个体化治疗的分子标记。