论文部分内容阅读
目的1.检测非梗阻性无精子症(NOA)睾丸组织中lncRNA的表达谱特征及表达差异,研究lncRNA在NOA中潜在功能。2.研究NOA患者睾丸组织中mRNA表达谱及表达特征,进一步探索mRNA在NOA发病机制重要通路的作用及意义,为NOA发病机制的研究提供理论基础。3.检测候选基因ASO3491在NOA患者血清、精浆中的表达,探究ASO3491在NOA中的表达特点及相关性,为NOA的临床诊断提供便利。4.研究E2F2在NOA中的表达特征,进一步为NOA的临床诊断提供新指标,也为ASO3491与E2F2在NOA发病机制中的后续研究提供理论基础,为NOA的临床治疗提供新的治疗方法。方法实验性研究严格按照纳入排除标准,且所有入组患者均签署知情同意书。1.收集2014年12月~2016年12月宁夏医科大学总医院确诊为NOA患者(n=3)、梗阻性无精子症(OA)患者(n=3)和生育功能正常睾丸脓肿患者(n=3)睾丸组织进行晶芯lncRNA+mRNA表达谱芯片检测。2.通过基因Go富集、KEGG pathway分析、疾病富集、基因靶向预测筛选候选基因。3.利用qRT-PCR检测基因的表达进一步验证微阵列测序的准确性。4.收集宁夏医科大学总医院生殖医学中心2017年03月~2017年12月NOA患者(n=35)、OA患者(n=35),正常对照(n=35)血清及精浆,采用qRT-PCR和ELISA检测血清、精浆中ASO3491、E2F2的表达,并分析其相关性。5.分析ASO3491、E2F2水平与性激素、睾丸体积之间的相关性。结果1.与睾丸脓肿患者相比,NOA患者睾丸组织中有4356个lncRNA高表达和715个lncRNA低表达;OA患者睾丸组织中有928个lncRNA高表达和20个lncRNA低表达;与OA组相比,NOA患者睾丸组织中有8437个lncRNA高表达和3808个lncRNA低表达。差异表达lncRNA多数属于基因间lncRNA。2.与对照组相比,NOA患者睾丸组织中有2971个mRNA高表达和1509个mRNA低表达;OA患者睾丸组织中有342个mRNA高表达和108个mRNA低表达;与OA组相比,NOA患者睾丸组织中有6040个mRNA高表达和5303个mRNA低表达。3.筛选出9个候选基因,3个lncRNA包括ASO3491、ENSG00000232527.3和ENSG00000227372.5,6个mRNA包括PRKX、AKT2、MLLT4、E2F2、SCD5和ACSS1。在候选基因中基因靶向生信分析结果表明ASO3491的靶向基因是E2F2,ENSG00000232527.3的靶向基因是AKT2,ENSG00000227372.5的靶向基因是SCD5。4.PCR验证9个候选基因在睾丸组织的表达水平结果与基因芯片检测结果一致。5.ASO3491在男性血清、精浆中均有表达。相比正常组与OA组,血清中ASO3491在NOA中显著高表达。精浆中ASO3491在正常组、OA组和NOA组差异无统计学意义。6.E2F2在男性血清、精浆中均有表达。相比正常对照组与OA组,精浆中E2F2在NOA中显著低表达。血清中E2F2在正常组、OA组和NOA组差异无统计学意义。7.血清ASO3491与精浆E2F2表达水平呈显著负相关(r=-0.699,p=0.000);血清ASO3491与血清T水平呈负相关(r=-0.363,P=0.000);血清ASO3491与睾丸总体积负相关(r=-0.446,P=0.000)。精浆E2F2与血清T水平呈显著正相关(r=0.344,P=0.000);精浆E2F2与睾丸总体积呈正相关(r=0.360,P=0.000)。结论1.lncRNA表达谱在NOA组改变显著,说明lncRNA在NOA的发生过程中发挥着重要的作用,可能为NOA的临床诊断提供新的生物标志物。2.mRNA表达谱在NOA组改变显著,并且差异表达的基因主要富集在生殖疾病通路,说明差异表达的基因在生殖细胞的生长与发育中非常重要。3.血清ASO3491、精浆E2F2在NOA中差异表达,可能成为临床诊断NOA新的生物标志物。4.血清ASO3491与精浆E2F2呈负相关。5.9个候选基因ASO3491、ENSG00000232527.3和ENSG00000227372.5,PRKX、AKT2、MLLT4、E2F2、SCD5和ACSS1均可能成为NOA临床诊断新的生物标志物。