【摘 要】
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目的:本论文在前期研究的基础上,通过建立慢性心力衰竭模型,研究在血管紧张素Ⅱ完全阻断、PI3K和PKB部分阻断的骨骼肌糖代谢PI3K/PKB/GLUT-4信号途径中的作用,并以坎离颗粒进行干预,阐述中药坎离颗粒干预慢性心衰新的作用机制。方法:1.取生长良好的C2C12成肌细胞,以胰岛素激活细胞糖代谢通路,血管紧张素Ⅱ完全阻断、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂Wortmannin和蛋白激酶B（P
【基金项目】
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micro RNAs/PI3-K/PKB/GLUT-4信号途径对慢性心衰时骨骼肌糖代谢异常的调控及坎离颗粒干预研究（国自然基金项目NO:81273959）；
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目的:本论文在前期研究的基础上,通过建立慢性心力衰竭模型,研究在血管紧张素Ⅱ完全阻断、PI3K和PKB部分阻断的骨骼肌糖代谢PI3K/PKB/GLUT-4信号途径中的作用,并以坎离颗粒进行干预,阐述中药坎离颗粒干预慢性心衰新的作用机制。方法:1.取生长良好的C2C12成肌细胞,以胰岛素激活细胞糖代谢通路,血管紧张素Ⅱ完全阻断、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂Wortmannin和蛋白激酶B（PKB）抑制剂SH-6部分阻断该通路,加入坎离颗粒进行干预。设立空白组、胰岛素组、模型组1（血管紧张素Ⅱ）、模型组2（Wortmannin）、模型组3（SH-6）、拮抗组1（坎离颗粒+血管紧张素Ⅱ）、拮抗组2（坎离颗粒+Wortmannin）、拮抗组3（坎离颗粒+SH-6）。2.应用荧光标记的2-脱氧葡萄糖（2-NBDG）测定各组C2C12细胞的葡萄糖摄取率。3.PI3K/PKB/GLUT-4通路相关的葡萄糖运载体4（GLUT-4）、PI3K、PKB和丝裂原活化蛋白激酶p38（p38MAPK）的蛋白表达及m RNA表达。4.细胞中三磷酸腺苷（ATP）、乳酸及乳酸脱氢酶（LDH）含量。结果:1.葡萄糖摄取率结果显示:C2C12细胞能够吸收2-NBDG,与空白组相比,胰岛素组细胞2-NBDG吸收显著升高（P＜0.01）;与胰岛素组相比,模型组三个组显著降低（P＜0.01）;与模型组相比,拮抗组三个组2-NBDG吸收均显著升高（P＜0.01）。2.Western blot结果显示:与空白组相比,胰岛素能够上调GLUT-4、P-PI3K、P-PKB蛋白的表达（P＜0.01）;与胰岛素组相比,模型组三个组GLUT-4、P-PI3K、P-PKB表达均降低（P＜0.01）;与模型组相比,拮抗组三组GLUT-4表达均升高（P＜0.01）,拮抗组1的P-PI3K、P-PKB表达升高,拮抗组3的P-PKB表达升高（P＜0.01）。而p38MAPK蛋白表达基本未见明显差异（P＞0.05）。3.Q-PCR结果显示:各组间GLUT-4、PKB、PI3K及p38MAPK的m RNA表达基本未见明显差异（P＞0.05）,但与模型组相比,坎离颗粒能够增加GLUT-4、PI3K的m RNA表达。4.能量代谢相关指标显示:（1）ATP:与空白组相比,胰岛素组ATP含量显著上调（P＜0.01）;与胰岛素组相比,模型组三个组含量下调（P＜0.01）;与模型组相比,拮抗组1、3组ATP含量升高（P＜0.05）。（2）乳酸:与空白组相比,胰岛素组乳酸水平显著升高（P＜0.01）;与胰岛素组相比,模型组三个组均降低（P＜0.01）;与模型组相比,拮抗组三个组乳酸水平升高（P＜0.01）。（3）LDH:与空白组相比,胰岛素组LDH含量显著降低（P＜0.01）;与胰岛素组相比,模型组三个组均升高（P＜0.01）;与模型组相比,拮抗组1的LDH含量降低（P＜0.01）。结论:1.坎离颗粒能够诱导C2C12细胞对葡萄糖的摄取,促进糖代谢。2.整体环节上,坎离颗粒可通过上调GLUT-4蛋白和PI3K、PKB磷酸化水平,显著改善血管紧张素Ⅱ完全阻断的PI3K/PKB/GLUT-4糖代谢功能障碍。3.局部环节上,坎离颗粒能够通过提高GLUT-4蛋白表达,对PI3K/PKB/GLUT-4途径PI3K及PKB分别阻断的糖代谢中起到改善作用。
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