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近年来,对于牙周疾病的病因学和病理学的研究,已经深入到微生物、免疫和生物化学等领域,但是牙周病的治疗方面总是落后于病因病理方面的探讨,达不到与后者相当的水平。许多学者致力于牙周愈合和再生的研究,期望更深地了解牙周组织的活动,探讨使受损的牙周组织再生的方法,为牙周病的治疗提供新的思路。蛋白多糖被认为是一种有用的工具,可以用来控制细胞的某些活动,而这些活动是伤口成功愈合的关键。因此,蛋白多糖可能在牙周组织中起调节作用,有助于损伤牙周组织的愈合。 fibromodulin是富含亮氨酸的小的间质蛋白多糖中的一种,与其同家族的蛋白多糖主要有biglycan,decorin和lumican等。这类蛋白多糖结构相似,与胶原关系密切,并能在细胞外基质中发挥协调作用,参与组织活动的调节。对fibromodulin的研究,在身体的其他组织已经比较深入,已知这种蛋白多糖广泛分布于巩膜、肌腱、角膜、关节软骨、皮肤、主动脉等多种组织的细胞外基质中,在组织自身稳定、损伤愈合、炎症和某种病理条件下(如纤维变性)行使重要功能,然而这些研究少有涉及牙周组织领域。本研究的目的是揭示fibromodulin在正常牙周组织、炎性牙龈组织和牙周损伤愈合过程中的免疫定位,同时将与fibromodulin关系密切的蛋白多糖biglycan,decorin及Ⅰ型、Ⅲ型胶原,同其进行比较,推测fibromodulin在牙周组织中的作用。 实验分四部分进行。 第一部分: 目的:研究fibromodulin在正常牙周组织中的分布和表达,认识fibromodulin在牙周组织自身稳定中的作用。 方法: 1.用免疫组织化学方法,对正常Lewis鼠磨牙牙周组织的fibromodulin的组织分布和细胞定位进行评价。 2.培养人类牙周细胞(牙跟成纤维细胞,牙周韧带成纤维细胞和成骨细胞)。 3.采用逆转录一聚合酶链反应技术,对人类牙周细胞中fibromodulin的表达进行测定,并凭借NIH凝胶分析软件对fibromodulin进行进一步的半定量分析。 4.同时对decorin,biglyean,I型胶原,Ixx型胶原做同样的实验,并与fibromo血lin相比较。 结果: 1.fibromodulin分布于牙跟上皮基底上区、牙酿和牙周韧带成纤维细胞及其基质。靠近口腔牙跟面的区域和牙周韧带一牙槽骨、牙周韧带一牙骨质界面有强阳性表达。 2.与fibromodulin来自同一家族的decorin和biglycan,显示与fibromo血lin不同的分布和与胶原纤维的联系。decorin强阳性表达于牙龋组织跟沟附近的区域。biglycan则在牙跟上皮着色明显。 3.从mRNA的表达来看,fibromodulin在成骨细胞中强烈表达,decorin和biglyean也有类似表现。I型、m型胶原的mRNA在牙跟成纤维细胞中表达水平高于成骨细胞和牙周韧带成纤维细胞。 结论:fibrornodulin在牙周组织和细胞中的特殊分布和表达,提示fibromoduhn可能与其他小蛋白多糖相互作用,调节胶原纤维的网络形成,并可能参与牙槽骨和牙骨质矿化口 第二部分: 目的:研究fibromoduhn在人类炎性牙跟组织中的分布和表达,探讨fibrom。血lin在炎症状态的牙靓组织中所起的作用。 方法: 1.从人类健康牙靓、牙跟炎和牙周炎患者的牙酿组织中取样。 2.用免疫组织化学的方法,观察fibromodulin在正常牙靓和炎性牙酿中的分布和表达。 结果: 1.fibromodulin在健康牙跟上皮呈中度着色,在牙踉结缔组织中无明显表达。 2.在炎性牙跟组织中,牙眼成纤维细胞和牙跟结缔组织基质呈现fibromo血lin强着色形式。 结论:fibromodulin在炎性牙敛组织中表达增强,可能是受炎症诱导,与其他基质成 II分相互作用,参与牙龋组织的炎症愈合过程。 第三部分: 目的:研究fibromodulin在牙周损伤愈合中的分布和表达,了解fibromodulin在牙周损伤愈合期间其时间上和空间上的定位,探讨它在牙周损伤愈合过程胶原纤维生成中与其他小蛋白多糖biglycan和decorin的关系。 方法: 1.建立牙周损伤愈合动物模型。选用成年鼠作为实验对象,损伤下领右侧磨牙的牙周组织(包括牙槽骨),同时也损伤下领左侧磨牙的牙周组织(不包括牙槽骨),定时跟踪观察28天至损伤愈合。 2.HE染色显示牙周损伤愈合的组织形态学表现。 3.采用免疫组织化学分析方法对不同时间内愈合组织中的fibromodulin,biglycan,decorin,I型胶原和m型胶原进行观察。 结果: 1.HE染色显示,牙周损伤后第1天,炎性细胞渗透入牙跟组织和跟沟,根侧损伤区周围形成纤维蛋白团块。牙周损伤后第3天和第5天,肉芽组织开始形成,成纤维细胞样细胞密度很高;移行的牙眼上皮覆盖损伤区;新近形成的胶原纤维呈束状分布。牙周损伤后第7天和第14天之间,新的牙周韧带形成。牙周损伤后第14天,上皮附着牙根表面;新骨开始形成。 2.免疫组织化学染色显示,在牙周损伤愈合早期,fibromodulin与胶原纤维束关系密切,分布于结缔组织I型胶原纤维分布区。higlycall与上皮再生紧密相关。dscorin主要位于上皮下区,与fibromodulin?