研究背景随着肿瘤发病率逐年升高,恶性肿瘤己成为目前危害人类健康最严重的疾病之一,也是造成人类死亡的主要原因。据世界卫生组织预测,2020年全球癌症新发病例将达到2000万,死亡将达1200万,癌症将是新世纪人类的第一杀手,并成为全球最大的公共卫生问题。恶性肿瘤是一种细胞的异型增生,它来自于正常细胞,又不同于正常细胞,它一方面不受控制的生长繁殖,另一方面又侵犯邻近正常并转移到远处的组织器官。转移是恶性肿瘤的最显著的生物学特征,是临床上大多数肿瘤患者治疗失败和致死的主要原因。这是一个多步骤、多因素参与的极其复杂的过程,受到肿瘤本身和宿主环境等因素的影响。近年来随着对恶性肿瘤发生发展机制的研究不断深入,人们越来越认识到肿瘤的炎性微环境在致癌性因素中占重要有地位,炎症与肿瘤的关系也以成为人们研究的焦点。本研究通过建立炎症实验动物模型及其基础上建立肿瘤模型,旨在探讨炎症在肿瘤发展过程中的作用。研究方法将C57BL/6雌性小鼠随机分成7组,其中LPS、LT.LC及Cele组4组小鼠,腹腔内注射浓度为lmg/ml LPS0.1ml(5mg/Kg),连续3天；PBS、PT及PC组3组小鼠,腹腔内注射PBS0.1ml(5mg/Kg),连续注射3天。从实验第5天开始各组小鼠分别给予不同处理,LPS组和PBS组：小鼠全部处死,观察肺组织病理表现、测定肺组织干湿重比、肺组织及肝组织重量。PT组及LT组：分别经尾静脉注射纤维肉瘤细胞T241,细胞浓度为1×107/ml,2周后处死全部小鼠,观察肺组织病理表现、肉眼观察及HE染色比较两组小鼠出现肺转移的数量；免疫荧光CD31染色比较两组小鼠肺组织内血管密度。PC、LC及Cele组：实验小鼠皮下接种T241细胞株,细胞浓度为1×107/ml,其中PC、LC组小鼠自由进食,Cele组小鼠给予塞来昔布0.5mg/Kg/d灌胃。4-5天后3组小鼠背部均出现瘤结节,开始测量肿瘤体积,每隔2-3天观察一次。21天后处死小鼠,观察肺组织病理变化及免疫荧光CD31染色比较两组小鼠肺组织内血管密度。实验数据结果以均数±标准差(x±s)来表示,采用SPSS16.0统计学软件进行统计分析,两样本比较采用t检验,肺转移率比较用卡方检验。研究结果1.炎症实验动物模型的建立LPS组小鼠腹腔注射脂多糖0.1ml(5mg/Kg),连续3天,自第2天开始小鼠逐渐出现眼内分泌物,消瘦,颈背部毛发竖起、色泽暗淡,行动迟缓、反应能力低下,摄食量急剧减少。PBS组实验小鼠腹腔注射PBS0.1m1,连续3天,小鼠无明显变化。第5天处死后,两组小鼠肺脏重量比较P<0.001,肝脏重量比较P=0.005,两组比较均有统计学意义。肺组织含水量比较差异有统计学意义(P<0.001)。肺组织病理学表现：PBS组小鼠肺脏结构致密,肺泡壁连续规整,肺泡内无组织液及红细胞渗出。LPS组小鼠肉眼观肺叶肿胀、充血,呈暗红色,镜下见肺泡壁连续性中断,毛细血管扩张充血,肺泡腔内可见大量红细胞、炎症细胞,气道粘膜见有大量炎性细胞浸润。2.肺部炎症对纤维肉瘤生长与转移的影响2.1PC组、LC组和Cele组PC组、LC组和Cele组实验小鼠皮下接种T241细胞株4-5天后,所有小鼠注射部位均可触及局部隆起包块,随着肿瘤体积增大,小鼠逐渐出现体重下降、摄食量减少、毛发竖起、色泽暗淡,行动迟缓、反应能力低下等表现。LC组小鼠的瘤结节明显比PC组生长迅速,自第10天开始有明显差异(P<0.05)；每个时间检测都可观察到塞来昔布(Celecoxib)对肿瘤生长的抑制作用,且随时间延长,肿瘤生长受抑越明显。至实验结束,Cele组小鼠肿瘤平均体积与LC组相比减少41.70%,具有明显统计学意义。2.2LT组和PT组实验第5天LT组和PT组小鼠均经尾静脉注射细胞浓度为1×107/ml纤维肉瘤细胞T2410.1m1(106)。LT组小鼠注射肿瘤细胞时精神状态、食欲及毛色较前好转,眼部分泌物消失,体重逐渐增加。但注射肿瘤细胞9天后再次出现食欲下降,颈背部毛发竖起、色泽暗淡,行动迟缓、反应能力低下,体重下降,至14天时已有部分小鼠精神萎靡,活动困难,不能进食,濒临死亡。PT组小鼠精神好,食欲正常,毛色光亮,体重增加,注射细胞12天后小鼠食欲较前稍有下降,毛色干燥,精神可,活动灵活。肺组织病理表现：肉眼观察,LT组70%(7/10)小鼠肺表面可见1个或多个肿瘤结节,PT组10%(1/10)小鼠肺表面见肿瘤结节,P=0.02,差异有统计学意义；HE染色：LT组部分肺泡壁结构破坏,结构不连续,局部有纤维组织增生,肺泡壁增厚,有炎症细胞浸润,80%(8/10)小鼠肺内可见肿瘤组织,且组织内血管丰富,充血,肿瘤细胞较正常细胞大,核大、深染,细胞数明显增多,细胞排列紊乱,极性消失。PT组肺泡壁结构完整,偶有局部不连续,炎症细胞较少,20%(2/10)小鼠肺内可见肿瘤组织,组织内血管增生不明显,无明显血管充血。HE染色下,两组小鼠肿瘤发病率比较P=0.023,差异有统计学意义。结论1.小鼠腹腔注射LPS5mg/kg,连续3天,可建立肺部炎症模型。2.LC组和PC组小鼠背部种植纤维肉瘤细胞T241,LC组比PC组小鼠肿瘤生长速度快,肺部组织损伤严重,毛细血管密度增加,表明炎症反应可促进肿瘤生长。3. Cele组和LC组小鼠背部种植纤维肉瘤细胞T241,Cele组比LC组小鼠肿瘤生长速度慢,肺部组织损伤轻,毛细血管密度降低,表明抗炎症治疗可抑制肿瘤生长。4.LT组和PT组小鼠均经尾部注射纤维肉瘤细胞T241,LT组比PT组肺部肿瘤发病率高,肿瘤组织内血管增生及充血更明显,肺部血管密度增加,表明炎症反应可促进肿瘤的转移。