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目的:1.通过建立S180实体瘤荷瘤鼠模型,观察褪黑素（melatonin, MT）、酵母硒（Selenium yeast, Se）以及两种药物的联合应用对S180肉瘤细胞的细胞周期蛋白依赖性激酶2 （cyclin-dependent kinase 2, CDK2）、p53和p21蛋白表达水平及凋亡的影响。观察与相同剂量的单药相比,两者联合应用对肿瘤细胞治疗效果的影响及其可能机制。2.通过建立S180腹水瘤荷瘤鼠模型,观察MT、Se以及两种药物的联合应用对S180荷瘤鼠的生存时间的影响。方法:1.将S180肉瘤细胞接种于小鼠右腋皮下,分为模型组、Se 100μg·kg-1组、Se 200μg·kg-1组、MT 40 mg·kg-1组、MT 80 mg·kg-1组、MT+ Se (MT 40 mg·kg-1 + Se 100μg·kg-1)组、环磷酰胺（CTX）组7组。各组灌胃给予相应药物,模型组给予酵母粉悬浊液。10d后处死小鼠,剥离肿瘤并称重。测定肿瘤组织内CDK2、p53、p21的表达水平,原位末端转移酶标记（terminal deoxynucleotidyl transferase -mediated dUTP nick ending-labeling, TUNEL）法和DNA Ladder观察凋亡。2.将S180肉瘤细胞接种于小鼠腹腔内,分为模型组、Se 100μg·kg-1组、Se 200μg·kg-1组、MT 40 mg·kg-1组、MT 80 mg·kg-1组、MT + Se组、CTX组7组。各组灌胃给予相应药物,模型组给予酵母粉悬浊液。记录小鼠的生存时间。结果:1.1 MT和Se对荷瘤鼠实体瘤的抑瘤率及肿瘤重量的影响Se(100和200μg·kg-1)、MT(40和80 mg·kg-1)、MT + Se、CTX均可抑制肿瘤的生长,抑瘤率分别为:43.51%、66.91%、38.40%、61.30%、60.42%、81.05%,均大于30%。与模型组相比,Se、MT、CTX组的肿瘤重量均明显减轻（P<0.01）;与Se 100μg·kg-1组相比,MT + Se可明显减轻肿瘤重量（P<0.05）;与MT 40 mg·kg-1组相比,MT + Se可明显减轻肿瘤重量（P<0.01）。1.2 MT和Se对肿瘤组织中CDK2、p53和p21表达水平的影响与模型组相比,Se 100μg·kg-1组、Se 200μg·kg-1组、MT 80 mg·kg-1组、MT + Se组小鼠肿瘤组织CDK2表达水平显著降低（P<0.01）;与Se 100μg·kg-1组相比,MT + Se组小鼠肿瘤组织CDK2表达水平明显降低（P<0.05）;与MT 40 mg·kg-1组相比,MT + Se组小鼠肿瘤组织CDK2表达水平显著降低（P<0.01）。与模型组相比,Se 200μg·kg-1组、MT 80 mg·kg-1组、MT + Se组小鼠肿瘤组织p53表达水平显著升高（P<0.01）;与Se 100μg·kg-1或MT 40 mg·kg-1组相比,MT + Se组小鼠肿瘤组织p53表达水平明显升高（P<0.05）。与模型组相比,Se 200μg·kg-1组、MT 80 mg·kg-1组、MT + Se组小鼠肿瘤组织p21表达水平显著升高（P<0.01）;与Se 100μg·kg-1或MT 40 mg·kg-1组相比,MT + Se组小鼠肿瘤组织p21表达水平显著升高（P<0.01）。1.3 Western blotting观察MT和Se对肿瘤组织中CDK2和p53表达水平的影响与模型组相比,Se 200μg·kg-1组、MT 80 mg·kg-1组、MT + Se组小鼠肿瘤组织CDK2表达水平显著降低（P<0.01）,p53表达水平明显升高（P<0.01）;与Se 100μg·kg-1或MT 40 mg·kg-1组相比,MT + Se组小鼠肿瘤组织CDK2表达水平明显降低（P<0.01）,p53表达水平明显升高（P <0.01）。1.4 MT和Se对DNA Ladder的影响与模型组相比,Se 100μg·kg-1组和MT 40 mg·kg-1组未出现明显的阶梯状DNA片段,而Se 200μg·kg-1组、MT 80 mg·kg-1组和MT + Se组DNA片段则出现了明显的阶梯状。1.5 TUNEL观察MT和Se对S180肉瘤细胞凋亡影响模型组未出现凋亡细胞,而Se(100、200μg·kg-1)组和MT(40、80 mg·kg-1)组以及MT + Se组均出现凋亡细胞,且Se 200μg·kg-1组、MT 80 mg·kg-1组和Se 100μg·kg-1+MT 40 mg·kg-1组的凋亡细胞明显多Se 100μg·kg-1组和MT 40 mg·kg-1组。1.6 MT和Se对肿瘤组织病理学改变的影响模型组肿瘤组织边缘未出现坏死组织,各实验组肿瘤组织边缘均出现不同程度的坏死组织。与Se 100μg·kg-1或MT 40 mg·kg-1组相比,MT + Se组小鼠肿瘤组织边缘坏死范围明显扩大。2. MT和Se对腹水型S180荷瘤鼠的生存时间的影响Se(100和200μg·kg-1)、MT(40和80 mg·kg-1)、MT + Se、CTX对腹水型荷瘤鼠的生命延长率分别为:10.42%,11.58%,15.44%,20.85%,10.04%,32.43%。Se(100和200μg·kg-1)组、MT(40和80 mg·kg-1)组、MT + Se组荷瘤鼠的生命延长率均小于30%。结论:1本实验将S180肉瘤细胞接种于右腋下造成移植性肿瘤模型,应用MT与Se进行治疗。各用药组的抑瘤率均>30%,肿瘤重量减轻,且作用随着剂量的增加而增大,MT与Se两者均具有抗肿瘤作用。与相同剂量的单药相比,两者联合应用后,抗肿瘤作用更加明显。虽然MT和Se对腹水型荷瘤鼠的生存时间有一定的延长作用,但没有统计学意义。2 MT与Se两者均能明显降低CDK2的表达水平、提高野生型p53的表达水平、提高p21的表达水平,两药联合应用后降低CDK2的表达水平和升高p53和p21的表达水平的作用更加明显。这些均提示MT与Se可能通过阻滞细胞周期发挥抗肿瘤作用。3各用药组肿瘤组织的凋亡细胞数目明显增多,且随剂量的增加而增多,Se 200μg·kg-1组、MT 80 mg·kg-1组和MT + Se组肿瘤组织出现了明显的阶梯状DNA。与相同剂量的单药相比,两者联合应用后凋亡细胞数目明显增多,阶梯状DNA片段化更加明显。病理学改变也表明与相同剂量的单药相比,MT与Se两者联合应用后,肿瘤周边坏死范围明显扩大。这些均提示诱导肿瘤细胞凋亡是MT与Se发挥抗肿瘤作用机制之一。