论文部分内容阅读
针对近年来新城疫（Newcastle Disease Virus，ND）流行日益复杂，免疫失败屡屡发生的现状，为更好地作好本地区新城疫的防制工作，本文从以下6个方面进行了新城疫病毒地方株分子流行病学调查及所致疫病控制的应用研究。 1、新城疫病毒地方株的分离鉴定与生物学特性 对1998～2002年间洛阳地区15个代表性新城疫发病禽群中的NDV进行了分离鉴定和生物学特性的研究。结果表明，所分离的15株NDV均呈现良好的血凝活性和特异的血凝抑制活性，对鸡胚的致病作用可被新城疫阳性血清所抑制。通过MDT、ICPI和IVPI指数的测定证实，LD-6-01和LR-2-00株是弱毒株，其余均为强毒株。弱毒株的血凝素热稳定性好，属慢速血凝解脱型；强毒株的血凝素热稳定性差，属快速或中速血凝解脱型。所有毒株均可较好地凝集鸡和人（O型血）的红细胞，但对其它动物的红细胞凝集性差异较大。对HI抗体为6log2的12日龄试验雏鸡攻毒表明，15个分离株中两个弱毒株可得到完全保护（100％）；13个强毒株中，LG-1-99、LR-1-98、LD-4-01和LD-3-00得到了基本保护（70—90％），而其它9个分离株（LD-1-98、LD-2-99、LD-5-01、LD-7-02、LR-3-02、LW-1-02、LG-2-00、LA-1-99和LE-1-01）则基本上得不到保护（0～20％）。但所有得不到保护的试验鸡的发病死亡时间均明显向后推迟。 2、新城疫病毒地方株的分子流行病学调查 利用RT-PCR技术，对所分离到的15个新城疫代表性地方毒株的F基因主要功能区片断进行了克隆和序列分析，并根据其47～435位核苷酸序列构建了系统进化树，确定了其毒力强弱和基因型。结果显示，15个地方毒株依据核苷酸和推导的氨基酸同源性的不同可分为明显的三群，群内各毒株同源性较高，而群间差异较大，未发现有因分离禽品种不同而引起的明显株间差异。其中第一群包括9株，涉及到各时间段分离的毒株和各分离禽种，属典型的基因Ⅶ型强毒株，高度集中于进化树的基因Ⅶ型C亚群区；第二群包括4株，属传统的基因Ⅵ型强毒株，分散于进化树的基因Ⅵ型区；第三群包括2株，属古典基因Ⅱ型弱毒株，分散于进化树的基因Ⅱ型区。综合说明本地区目前流行的NDV以新型的基因Ⅶ型最为普遍，同时兼有传统的基因Ⅵ型和古老的基因Ⅱ型；并提示基因Ⅶ型各毒株来源相近，在本地区流行时间较短，株间差异不大。 3、新城疫病毒地方株不同基因型三价灭活油乳苗的研制 应用两株当地流行的新城疫病毒基因Ⅵ型和Ⅶ型代表株（LD-3-00和斯城改病毒地方株兮各流行病李们女践其改扁拉刊LD一7-02），配以传统的La sota株（基因11型）成功地研制了不同基因型三价新城疫灭活油乳苗.经实验室检验及大田试验证明，该三价苗安全可靠，在接种后第42天时Hl抗体效价仍保持在7.51092，攻毒试验保护率达100%;在大田试验中，与新城疫弱毒疫苗联合应用，整体保护率可达99%以上，能有效地控制当地新城疫的暴发和流行。 4、NDV地方株三价灭活油乳苗与La sota株灭活油乳苗免疫效果比较 将研制的地方株三价灭活油乳苗与La Sota株单价灭活油乳苗进行了免疫效果的比较.结果显示，三价苗免疚组在接种后各个时期所产生的HI杭体效价与La Sota株灭活苗免疫组无明显差异（P>0.05），至接种后第42天二者均具有7.31092。但在对具有相同HI杭体水平的试验鸡进行的不同毒株攻毒试验中，二者差异较大.对于F48E9标准强毒株的攻击，无论是La Sota株疫苗免疫鸡还是三价灭活苗免疫鸡，在Hl杭体效价为6109:以上时均能100%地被保护;而在La sota株疫苗免疫鸡HI效价为6109:左右时，对基因vn型野毒株的攻击，保护率却只有O%一20%;此时，三价疫苗免疫鸡则具有60%一70%的保护率;当HI效价达81092左右时，La Sota株疫苗免疚鸡对基因vII型野毒株的攻击也只有80%的保护率，而三价疚苗免疚鸡可100%地被保护;La sota株疫苗免疫鸡只有HI效价在9109:以上，方可100%地抵杭基因vn型野毒株的攻击.说明应用由地方分离株不同基因型野毒株配以传统的La Sota株所制备的三价灭活苗的免疫效果明显优于常规的单价La sota株灭活苗，是控制目前新形势下新城疫流行的有效措施. 5、NDVF基因DNA疫苗对地方株三价灭活油乳苗的免疫协同作用 为进一步探讨控制新城疫发生和流行的新途径，本文首次观察了F基因peDNA3真核表达质粒（DNA疫苗）对地方流行株三价灭活油乳苗的免疫协同作用.结果显示:在7日龄时应用三价灭活油乳苗和DNA疫苗联合免疫的鸡群，到56日龄整个观察期内，不但利用MTT法检测的T、B淋巴细胞增殖情况显示出联合免疫组鸡的胸腺T淋巴细胞对ConA、法氏囊B淋巴细胞对PMA的反应均明显强于单纯三价油乳苗免疚组（其中除在接种后第7天时两组鸡B淋巴细胞增殖的OD570值差异不显著外，其余各检测时间两组间均表现为差异显著（P<0.05）或极显著（P<0.01），特别是T淋巴细胞增殖情况在接种14天后均表现为差异极显著，p<0 .01.）;而且联合免疫组的HI杭体效价也持续性高于单纯三价油乳苗免疫鸡群，并在免疚接种后35一49天时差异显著（p<0 .05）.在56日龄（免疫接种后第49天）时进行的LD一7一02野毒株攻毒保护试验中，