【摘 要】
：
目的:伤口愈合是一个重要的生理过程,同样也是临床医学中有待解决的问题之一。植物来源的外泌体绿色安全且高效,有望对伤口愈合提供新的解决方法。方法:1.本文采用超速离心法结合密度梯度离心法提取并纯化了人参外泌体,并通过电镜、粒径等实验检测人参外泌体的基本特征,通过考马斯亮蓝染色、核酸电泳等实验检测外泌体中蛋白质、核酸成分,通过蛋白质组学对外泌体中的蛋白质成分进行检测及分析。2.并用荧光染料标记外泌体,
论文部分内容阅读
目的:伤口愈合是一个重要的生理过程,同样也是临床医学中有待解决的问题之一。植物来源的外泌体绿色安全且高效,有望对伤口愈合提供新的解决方法。方法:1.本文采用超速离心法结合密度梯度离心法提取并纯化了人参外泌体,并通过电镜、粒径等实验检测人参外泌体的基本特征,通过考马斯亮蓝染色、核酸电泳等实验检测外泌体中蛋白质、核酸成分,通过蛋白质组学对外泌体中的蛋白质成分进行检测及分析。2.并用荧光染料标记外泌体,观察BJ1、Ha Cat、HUVEC三种皮肤细胞对外泌体的摄入情况,用CCK-8法检测外泌体对三种皮肤细胞的增殖影响,采用划痕实验检测外泌体对皮肤细胞的迁移能力的影响,用流式细胞术检测外泌体对三种皮肤细胞的周期影响,用Western Blot检测外泌体作用后,皮肤细胞中蛋白表达水平,用ELISA试剂盒检测外泌体作用于三种皮肤细胞后,对MMP-1、fibronectin-1、elastin-1和COL1A1的影响情况,用管形成实验检测外泌体对HUVEC成管能力的影响。3.皮下注射标记后的外泌体,观察小鼠皮肤对外泌体的摄入情况,通过小鼠皮肤损伤实验验证人参外泌体对皮肤损伤的修复作用,通过HE染色、Western Blot检测外泌体作用于小鼠损伤皮肤后,组织,及蛋白的变化情况。结果:1.结果显示差速离心法结合密度梯度离心法可分离出人参来源外泌体。考马斯亮蓝染色结果显示,在60、25以及15 k Da等多个位置处存在明显条带,且纯化前后外泌体蛋白有明显变化,用核酸电泳检测外泌体中含有核酸成分,蛋白质组学检测外泌体中含有202种可定量蛋白,经分析,其中涉及核糖体通路、氧化磷酸化通路等代谢通路的蛋白较多。2.实验证明外泌体可以被三种皮肤细胞摄入,CCK-8法证明外泌体可促进三种皮肤细胞的增殖（P＜0.05）,划痕实验证明外泌体可促进皮肤细胞的迁移能力,流式细胞术检测外泌体可使三种皮肤细胞的S期增加,Western Blot结果表明外泌体可通过ERK和AKT/m TOR途径调控皮肤细胞增殖（P＜0.05）。ELISA试剂盒证明外泌体促进三种皮肤细胞对MMP-1、fibronectin-1、elastin-1和COL1A1的分泌,同时外泌体还能增强HUVEC的成管能力。3.小鼠皮肤损伤实验结果表明,外泌体可被小鼠皮肤细胞摄入,同时外泌体可加速皮肤损伤后的恢复,促进皮肤增殖,并能降低炎症因子NF-κB（核因子κB）、INOS（一氧化氮合酶）、COX-2（环氧化酶）表达（P＜0.05）。结论:本文研究表明,超速离心法联合密度梯度离心法可提取并纯化人参外泌体,通过实验证明外泌体可通过调节皮肤细胞周期,激活ERK和AKT/m TOR通路促进皮肤细胞增殖,并能促进MMP-1、fibronectin-1、elastin-1和COL1A1的分泌,加速皮肤伤口愈合,同时减轻炎症因子表达。
其他文献
目的:本研究主要对鹿茸的三种提取物进行提取,然后对其进行抗抑郁作用研究以及作用机制研究。科学全面的对鹿茸提取工艺及其抗抑郁作用进行深入研究,为鹿茸抗抑郁作用提供一定理论基础。方法:1.鹿茸提取物的制备本研究通过胶体磨辅助酶法对加酶量、酶解时间、酶解温度进行单因素试验,通过正交试验确定了鹿茸水提取物的提取工艺;参照文献方法对鹿茸多肽进行醇沉法提取,并测定其蛋白含量;通过超临界CO2萃取法进行鹿茸脂溶
目的:中医具有多靶点、多环节、多途径的优势,具有整体治疗的理念,人参作为中药已有1000多年历史。据现有研究报道,人参的不同部位具有不同的药用价值和特性。目前对于人参的差异研究主要集中在不同种类、不同产地、不同年限、不同炮制方法以及地上与地下部分等方面,而对于人参根皮和芯的差异研究鲜有报道,并且其在体内的代谢模式差异也尚不明确。本研究旨在利用色谱技术分析人参芯与人参皮中主要皂苷成分的含量差异;利用
目的:基于网络药理学与基因组学联合分析探讨生脉饮（SMY）对异丙肾上腺素（ISO）诱导心肌肥厚大鼠的保护作用及分子机制研究。从动物和细胞水平两方面阐述SMY改善心功能、抗心肌肥厚的分子作用机制。方法:1.网络药理学预测收集与筛选SMY中药化学成分与对应的候选靶标基因,收集心肌肥厚相关靶标基因,构建并分析药物-活性成分-作用靶标网络,构建靶蛋白互相作用（PPI）网络图,进行GO富集及KEGG通路分析
目的:通过实验测定人参皂苷CK对于G-四链体结构形成及稳定性的影响,并考察其对含G-四链体结构的癌症基因表达的调控作用,进一步探索人参皂苷CK抗癌的作用机制,为人参皂苷CK在复制和转录方面的药理学研究提供新的方向,阐明人参皂苷CK在基因层面的抗癌作用机理。方法:（1）圆二色谱测定6个富G碱基序列的二级结构,并测定熔融曲线考察人参皂苷CK对于G-四链体稳定性的影响。（2）与荧光配体N-Methyl
目的:本课题对人参糖蛋白（panax ginseng glycoproteins,PGG）进行改善少弱精症的研究,并将其制备成肠溶微丸,评价药效。方法:（1）采用醇提、水煎、超滤、透析方法提取PGG（2）采用苯酚-硫酸法、间羟基联苯法和Lowry法对PGG进行理化性质测定（3）采用高效液相色谱法（High performance liquid chromatography,HPLC）测定PGG分子
目的:随着环境污染日益增多,大气臭氧层日见稀薄,紫外线照射强度增大,黄褐斑、雀斑等皮肤问题严重影响人们的生活质量,因此具有美白功效的护肤品受到了许多人的追捧。近年来已有研究学者对葛根黄酮和异黄酮抑制酪氨酸酶活性做了报道,但是对葛根水溶性总蛋白美白活性研究尚未报道,因此我们通过前期筛选确定了葛根水溶性总蛋白为美白的活性成分,并利用响应面BBD设计试验获得最佳葛根蛋白提取工艺,在此基础上对其进行理化性
目的:通过DNA条形码生物技术手段对淫羊藿的真伪进行鉴定,UHPLC-Q Exactive Orbitrap/MS结合多元统计分析技术对不同基原淫羊藿的化学成分差异,并探究淫羊藿对顺铂诱导的肾损伤的保护机制,为临床应用提供实验基础。方法:1.利用天根试剂盒提取叶片总DNA,对ITS2序列进行PCR扩展与测序,计算K2P遗传距离,构建系统发育树。2.采用UHPLC-Q Exactive Orbitr
目的:利用大气压基质辅助激光解吸电离质谱（AP-MALDI MS）和电喷雾电离质谱（ESI MS）分析小分子化合物,并建立分析方法。利用AP-MALDI MS结合功能化多壁碳纳米管（MWCNTs）基质快速分析生物碱、氨基酸、农药。利用高效液相色谱-电喷雾-多级串联质谱（HPLC-ESI-MSn）建立分析人参皂苷转化产物的方法,并快速鉴定转化产物结构。方法:合成与表征了4种基于MWCNTs的基质,即
目的:优化真菌Y定向水合生物催化体系,实现PPD（Protopanaxadiol）型人参皂苷C25-OH衍生物的规模化制备。对转化过程进行实时监测,厘清不同转化培养基组成对真菌Y代谢流分化的影响,阐明目标衍生物的转化途径。明确转化后的C25-OH衍生物结构,对纯化后的衍生物进行抗肿瘤的活性检测和构效关系初探,以增加抗肿瘤活性先导化合物储备。方法:以生物量（biomass）为指标,对不同菌丝富集方式
目的:制备金丝桃苷混合纳米胶束（Hyp-F127/TPGS）并优化其制备工艺。同时基于肠道菌群和血清脂质组学方法,探讨Hyp-F127/TPGS对高脂饮食诱导的载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠的影响,并分析其治疗动脉粥样硬化（AS）的潜在作用机制。方法:采用薄膜分散法制备Hyp-F127/TPGS。在单因素实验和Plackett-Burman实验设计的基础上,结合Box-Behnken响