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前言 临床上多种疾病可导致脑缺血，而海马神经元的易损性常被当作研究脑缺血的主要模型。短暂性脑缺血可出现神经元变性、坏死、迟发性神经元死亡和/或凋亡。降钙素基因相关肽（Calcitonin Gene-Related Peptide，CGRP）具有强烈的舒张脑血管效应和神经保护作用。神经生长因子（Nerve Growth Factor，NGF）可促进神经元生长发育，参与受损神经元的修复。蛋白激酶C（Protein Kinase C，PKC）是一种依赖于磷脂和Ca2+的蛋白激酶，在细胞凋亡过程中为一重要的参与细胞活动的物质。细胞外信号调节蛋白激酶（Extracellular signal regulated kinase，Erk）是MAPK家族成员，通过Ras-Raf-MEK-Erk信号通路的激活促进细胞增殖，抑制细胞凋亡。 本实验建立新型的全脑缺血再灌注模型，应用组织病理学、免疫组织化学、原位杂交等方法检测脑缺血再灌注后神经元凋亡和PKC、Erk、Erk mR-NA的表达以及颈动脉注射CGRP和NGF对上述指标的影响。 方法 首先取健康的Wistat大鼠30只（体重300-350g），采用改进的颈动脉负压分流法制作大鼠全脑缺血再灌注模型。施加实验因素，分成5组：假手术组（sham组，n=6），缺血再灌注组（I/R组，n=6），CGRP组（1μg/ml，n=6），NGF组（500U/ml，n=6），CGRP与NGF合用组（C&N组，n=6）。肉眼观察瞳孔颜色的变化；光镜观察大脑皮质及海马组织学变化；免疫组化SABC法检测大脑皮质及海马PKC、Erk的表达。采用原位杂交方法检测大脑皮质及海马Erk mRNA的表达。实验结果采用SPSS软件包进行数据统计分析及处理。 结果 瞳孔颜色变化证实，该模型缺血完全，再灌注充分。光镜检查结果显示，实验组有明显的缺血改变。免疫组化结果表明，sharn组，PKC、Erk在细胞核内无表达，在细胞质内微量表达;FR组，PKC在细胞质内表达增加，Erk在细胞核内少量表达（P<0.01）;CGRP组和NGF组大脑皮质及海马PKC的表达较FR组明显减少，而Erk的表达较FR组明显增加（P<0.01）;C&N组大脑皮质及海马PKC的表达较FR组、CGRP组和NCF组均明显减少，而Erk的表达较FR组、CGRP组和NGF组均明显增加（P<0.01）。原位杂交结果表明，sham组，Erk mRNA在顶叶皮质及海马CAI区细胞核内无表达，细胞质内微量表达;FR组，Erk mRNA在细胞质内表达较sham组增加，其中海马表达明显高于皮质;C GRP组和NGF组，大脑皮质及海马Erk mRNA表达较FR组明显增加（P<0.01）;C&N组，大脑皮质及海马Erk mRNA表达较CGRP组和NGF组均明显增加（P<0.01）。讨论 缺血性脑损伤发生后引起复杂的病理生理过程，将导致神经元变性、坏死、迟发性神经元死亡和/或调亡。目前，尚无安全有效的保护缺血性脑组织免受损害的神经保护剂。 本研究探讨了CGRP和NGF保护神经元的机制。CGRP是1982年利用基因重组技术发现的第一个活性多肤，广泛存在于神经组织，通过结合特异性受体产生强烈的脑血管舒张效应。NGF是神经系统最重要的神经营养因子之一，通过与效应神经细胞上的受体trkA结合，维持成熟神经元的存活，促进损伤神经细胞的修复，参与神经细胞的凋亡过程。二者都是与其特异性受体结合，通过一系列信号级联传导途径将信号传至细胞核。Erk是MAPK通路中重要成员之一，主要功效是将信号从细胞外传导至细胞核，通过磷酸化活化转录因子而调控特定基因的表达。PKC又称为C激酶，是一种依赖于磷脂和CaZ‘的蛋白激酶，大量研究表明，PKC广泛参与细胞信息传递如激素分泌、神经递质传导、细胞分泌、细胞增殖等。本实验采用改进的颈动脉负压分流法制作大鼠全脑缺血再灌注模型。瞳孔颜色变化及光镜检查FR组神经元细胞肿胀、尼氏体减少，证实模型缺血完全，再灌注充分。本实验结果表明，FR组，PKC在胞浆内表达增加与脑缺血再灌注损伤密切相关，Erk及Erkm洲A的表达增加是其对缺血损伤的一种保护机制，海马CAI区PKC、Erk、Erk mRNA的表达明显高于皮质，可能与其神经元易损性有密切关系;CG即组和NGF组大脑皮质及海马PKC的表达较FR组明显减少，E比及E人mRNA的表达较FR组明显增加，说明CGRP和N GF可下调缺血再灌注脑组织PKC的表达，上调E浅及E论mRNA的表达;C&N组大脑皮质及海马PKC的表达较FR组、CGRP组和NGF组均明显减少，Erk及Erk mRNA的表达较FR组、CGRP组和NGF组均明显增加，说明CGRP和NGF联合应用可下调缺血再灌注脑组织PKC的表达，增加E庆及E庆mRNA的表达，对保护缺血神经元有协同作用。结论 1.全脑缺血再灌注大鼠脑顶叶皮质及海马CAI区PKC、E比及E论mRNA较sh吻组表达增加，说明缺血脑组织促进和抑制凋亡的因素并存。 2.CGRP下调缺血再灌注脑组织皮质及海马PKC的表达，上调Erk及Erk mRNA表达，可能是其保护神经元的分子机制之一。 3.NGF下调缺血再灌注脑组织皮质及海马PKC的表达，上调E人及Erk mRNA表达，可能是其保护神经元的分子机制之一。 4.cGRP和NGF联合应用显著下调PKc的表达及上调Erk及ErkmR-NA表达，对保护缺血神经元有协同作用。